Vývoj metody pro HPLC separaci astaxanthinu, β-karotenu a luteinu

Abstract

Tato bakalářská práce se zabývá vývojem metody separace karotenoidových barviv, především astaxanthinu, β-karotenu a luteinu, produkovaných mikroskopickou zelenou řasou Tetracystis pulchra. Práce porovnává publikované metody separace karotenoidových barviv a snaží se o optimalizaci metody vhodné pro analýzu extraktů barviv z buněk Tetracystis pulchra. Optimalizované HPLC-DAD podmínky pro separaci karotenoidů byly následující: mobilní fáze A - ACN/MeOH/0,05M Tris-HCl pufr (pH = 8,0): 94/2/4, mobilní fáze B - MeOH/EtOAc: 68/32 za gradientové eluce, průtok 0,25 ml min˗1 , teplota kolony 28 řC. Byla použita kolona Kinetex C18 (100 × 2,1 mm, 2,6 µm), dávkovaný objem byl 20 µl, detekce probíhala při vlnové délce 470 nm. Celková doba analýzy byla 23 minut. Klíčová slova: HPLC, astaxanthin, β-karoten, lutein

This bachelor's thesis deals with the development of a method for the separation of carotenoid pigments, especially astaxanthin, β-carotene and lutein, produced by the microscopic green alga Tetracystis pulchra. The work compares published methods for the separation of carotenoid pigments and attempts to optimize a method suitable for the analysis of pigment extracts from Tetracystis pulchra cells. Optimized conditions for HPLC-DAD separation of carotenoid pigments were as follows: mobile phase A - ACN/MeOH/0,05M Tris-HCl buffer (pH = 8,0): 94/2/4, mobile phase B - MeOH/EtOAc: 68/32 under gradient elution, flow rate 0,25 ml min˗1 , column temperature 28 řC. The column used was Kinetex C18 (100 × 2,1 mm, 2,6 µm), injection volume was 20 µl and UV detection was performed at 470 nm. Total analysis time was 23 minutes. Key words: HPLC, astaxanthin, β-carotene, lutein