Regulace C-MYC onkoproteinu přírodními látkami.
Regulation of C-MYC oncoprotein by natural drugs.
diplomová práce (OBHÁJENO)
Zobrazit/ otevřít
Trvalý odkaz
http://hdl.handle.net/20.500.11956/74763Identifikátory
SIS: 156340
Kolekce
- Kvalifikační práce [19113]
Autor
Vedoucí práce
Konzultant práce
Vališ, Karel
Oponent práce
Flieger, Miroslav
Fakulta / součást
Přírodovědecká fakulta
Obor
Biochemie
Katedra / ústav / klinika
Katedra biochemie
Datum obhajoby
23. 5. 2016
Nakladatel
Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakultaJazyk
Čeština
Známka
Velmi dobře
Klíčová slova (česky)
C-MYC, YAP, naftochinony, laktony seskviterpenů, programovaná buněčná smrtKlíčová slova (anglicky)
C-MYC, YAP, naphochinones, sesquiterpene lactones, apoptosisSeskviterpenové laktony, mezi něž patří látka cnicin obsažená v rostlině Cnicus benedictus, jsou látky s protinádorovými účinky, které vyvolávají v buňkách oxidativní stres a aktivují signalizační dráhy způsobující v konečném důsledku apoptosu rakovinných buněk. Několik těchto látek je ve fázi klinického testování a jeví se jako slibná protinádorová léčiva. V této práci je zkoumán vliv cnicinu na onkoprotein C-MYC, který je nadměrně exprimován u většiny lidských nádorových tkání, na helikasu z rodiny DEAD-box proteinů DDX3 podezřelou z reakce na cnicin a na vybrané metabolické geny a proteiny. Tato práce pomocí imunodetekce a kvantitativního PCR popisuje regulaci C-MYC onkoproteinu cnicinem, která probíhá jak na úrovni transkripce aktivací Hippo signalizační dráhy, tak na úrovni stability hotového proteinu vlivem cnicinu na PIM-2 kinasu. Dále je popsán vliv cnicinu na expresi a stabilitu DDX3 proteinu, jehož absolutní množství však cnicin významně neovlivňuje. Vliv cnicinu na expresi proteinu DDX3 na úrovni transkripce zůstává nejasný. Pomocí LC-MS kvantitativní analýzy a kvantitativní PCR bylo také zjištěno, že cnicin neovlivňuje metabolismus sacharidů, avšak zasahuje do metabolismu proteinů a nukleotidů regulací množství glutaminového transportéru SLC1A5.
Sesqiterpene lactones, a group of plant secondary metabolites which include Cnicin from Cnicus benedictus plant, have an anti-proliferative and anti-tumor effect on mammalian cells by activating specific signaling pathways while also generating oxidative stress. These factors combined drive tumor cell apoptosis. A few of these compounds have reached clinical trials and seem to be a promising chemotherapeutics. The focus of this work is to elucidate the effect of cnicin on C-MYC transcription factor and oncoprotein which is overexpressed in majority of tumor tissues, the effect of cnicin on DEAD-box RNAhelicase DDX3 and on the expression levels of several metabolic genes is also studied. Through the use of western blotting, immunodetection and qPCR it was found out, that cnicin is regulating the expression of C-MYC oncoprotein on both transcriptional and translational levels, while also lowering C-MYC protein stability probably through the effect on PIM-2 kinase. Cnicin is not affecting the total amount of DDX3 protein in cells, but it seems it is lowering its degradation rate. The possible transcriptional regulation of DDX3 by cnicin is still not clear and requires further research. With the use of LC-MS quantitative analysis and qPCR, it was found out that cnicin does not affect the metabolism of...