Metoda FISH a její využití v protistologii

Abstract

Fluorescenční in situ hybridizace (FISH) je technika, která umožňuje lokalizaci a identifikaci specifické sekvence nukleotidů v DNA, popřípadě RNA, které jsou pak následně viditelné pod mikroskopem. FISH spočívá nejprve v denaturaci dané nukleové kyseliny, a to buď vysokými teplotami nebo působením denaturačních činidel jako je například formamid, čímž dojde k oddělení řetězců. Po následném navozením reasociačních podmínek dojde podle pravidel komplementarity k navázání značené krátké próby na vyšetřované vlákno DNA či RNA, tento proces se nazývá hybridizace. K hybridizaci dochází in situ, tedy přímo ve vyšetřovaném vzorku. Próby mohou být značeny buď přímo pomocí fluorescenčních barviček a nebo nepřímo, kdy je próba značena haptenem, kteýá je následně detekována pomocí značených protilátek nebo streptavidinu. FISH má velké množství aplikací v molekulární biologii a lékařské vědě. V laboratorním výzkumu v protistolgii může být FISH využita například k mapování chromozomálních genů, ke studiu evoluce genomu, analýze jaderné organizace nebo pro potvrzení původu sekvence DNA. Klíčová slova: FISH, fluorescence, sonda, identifikace buněk, environmentální studie

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a technique that allows the localization and identification of specific sequences of nucleotides in DNA or RNA, which is subsequently visible under the microscope. FISH involves first denaturing the nucleic acids, either using high temperatures or by treatment with denaturing agents such as formamide.After subsequent induction of reasociation, the examined DNA or RNA pairs according to the complementarity rules with the short molecule called the probe, this process is called hybridization. Hybridization occurs in situ, that is within the examined specimen. Probes can be labeled either directly using fluorophores, or indirectly with a hapten, which is a substance having antigenic properties, which is subsequently detected using labeled antibodies or streptavidine. FISH has a large number of applications in molecular biology and medical science. In laboratory research in protistolgii FISH can be used for example to map the chromosomal genes to study the evolution of genome, analysis of nuclear organization or to confirmation of the origin of DNA sequence. Key words: FISH, fluorescence, probe, cell identification, environmental studies