Genová exprese v průběhu expanze oocyt-kumulárních komplexů a časného embryonálního vývoje savců

Abstract

CONCLUSIONS Major resultsof this PhD thesiscan be summarizedas follows: The real-time RT-PCR has become a tool for detection and quantifrcation of RNA targetsandis being utilized in geneexpressionstudyin our laboratory. The gene expression proÍile of GDF9, during porcine oocytes, cumulus andgranulosacells fu vitro cultivation and in vivo cumulus oocyte expansion was assessed.The obtained partial sequence was up|oaded in EMBL/GenBanlďDDBJ databaseand gene was localized on pig chromosome2. Conhary to mouse,GDFS mRNA was detectedfor the ťrrsttime also in porcine somaticfollicular cells. During cultivation,thetranscriptgraduallydecreasedin all the samples. we studied signalling pathways involved in IGFI promotion of FSH-induced oocyte-cumulusexpansion.we found that IGFI in combinationwith FSH increased the production of HA. The expression of Has2 mRNA in cumulus cells gradually decreasedduring cultivation' our results suggest that the PIK3/AKT dépendent pathwayis involved in the promotionof FSH stimulatedsynthesisof HA in porcine OCCs. Bovine blastocystsdeveloped from fertilized oocýes under different in vitro or in vivo conditions were comparedin the expressionof threegenes(Bax, L37 and S3o/.The embryosdiffer in the abundanceof Bax transcripl the elevatedlevels were detected in blastocyst completely cultivated...

31 4 SHRNUTÍ Zavedla jsem real-time RT-PCT mezi základní metodiky, využívané v naší laboratoři. Během in vitro kultivace prasečích oocytů, kumulárních a granulózních buněk a in vivo expanze oocyt kumulárních komplexů byl stanoven expresní profil GDF9 mRNA, proteinu z rodiny TGFβ faktorů. Získaná parciální sekvence byla vložena do databáze EMBL/GenBank/DDBJ a gen byl lokalizován na prasečím chromozomu 2. Na rozdíl od myši byl transkript detekován poprvé též v granulózních i kumulárních buňkách rostoucích a preovulačních folikulů. Hladina GDF9 mRNA během in vitro kultivace i in vivo expanze klesala ve všech vzorcích. Popsali jsme signální dráhy, kterými insulínový růstový faktor I (IGFI) zvyšuje FSH-stimulovanou expanzi oocyt-kumulárních komplexů. Potvrdili jsme, že IGFI v kombinaci s FSH zvyšuje produkci hyaluronové kyseliny. Během kutivace kumulárních buněk s FSH došlo k postupnému snížení exprese Has2 mRNA. Avšak po 20 hodinách byla hladina stále detekovatelná v případě, kdy byl do média přidán i IGFI. Pomocí inhibitorů Akt a MAP kinázy jsme prokázali, že aktivita obou kináz je důležitá pro produkci i retenci HA. U bovinních blastocyst, připravených za rozdílných experimentálních podmínek (in vitro, in vivo v ovčím vejcovodu a v kombinaci obou způsobů) byla stanovena exprese genů pro Bax, L37 a S3a. V...