Vliv analogů hemu na strukturu a konformační stabilitu cytochromu b5
Effect of heme analogs on structure and conformational stability of cytochrome b5
bakalářská práce (OBHÁJENO)
Zobrazit/ otevřít
Trvalý odkaz
http://hdl.handle.net/20.500.11956/51113Identifikátory
SIS: 92367
Kolekce
- Kvalifikační práce [19113]
Autor
Vedoucí práce
Oponent práce
Hudeček, Jiří
Fakulta / součást
Přírodovědecká fakulta
Obor
Biochemie
Katedra / ústav / klinika
Katedra biochemie
Datum obhajoby
13. 9. 2011
Nakladatel
Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakultaJazyk
Čeština
Známka
Výborně
Klíčová slova (česky)
elektroforesa, proteolysa, cytochrom b5, stabilitaKlíčová slova (anglicky)
electrophoresis, proteolysis, cytochrome b5, stabilityCytochrom b5 je součástí systému oxidas se smíšenou funkcí (MFO systému), který se podílí na metabolismu řady endogenních i exogenních látek. Jeho funkce je úzce spjata s dalším významným enzymem tohoto systému - cytochromem P450. Cílem této bakalářské práce bylo prozkoumat, jak analogy hemu ovlivňují strukturu a konformační stabilitu cytochromu b5. Ke studiu byla použita v laboratoři dosud nezavedená metoda - pulzní proteolýza, která využívá štěpení proteinu v různých koncentracích močoviny. Protein byl štěpen nespecifickou proteasou thermolysinem, která je aktivní i v prostředí s vysokou koncentrací močoviny. Pro studium stability cyt b5 byly připraveny holoformy cytochromu b5 obsahující hem a jeho analogy, kde jsou místo železitých iontů vázány ionty Mn3+ , Cr3+ či Co3+ . Analogy cytochromu b5 byly připraveny pomocí titrace apoformy cytochromu b5 heminem a jeho analogy. Pulzní proteolýza byla provedena i s apoformou cytochromu b5 a výsledky byly vyhodnoceny za použití elektroforézy v polyakrylamidovém gelu v přítomnosti dodecylsulfátu sodného. Klíčová slova: elektroforéza, proteolýza, cytochrom b5, stabilita.
Cytochrome b5 is a component of the system of mixed function oxidases (MFO system) participating in metabolism of many endogenous and exogenous substances. Its main function in MFO system is reduction of cytochrome P450. The first aim of the thesis was to employ the pulse proteolysis to evaluate the influence of heme analogs on structure and conformational stability of cytochrome b5. This method utilizes the cleavage of protein by nonspecific protease (thermolysin) what is active even in the medium with high concentration of urea. Four forms of cytochrome b5, reconstituted with protoporphyrine IX containing Fe3+ , Mn3+ , Cr3+ or Co3+ ions, were prepared using titration of apocytochrome b5 with hemin or its analogs. The stability of individual forms of cytochrome b5 was than compared with apocytochrome b5 using pulse proteolysis. Finally, the relative amounts of residual cytochrome b5 were determined by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. Key words: electrophoresis, proteolysis, cytochrome b5, stability. (In Czech)