Interakce polyomavirů s proteazomálním systémem hostitelských buněk

Abstract

Interakce polyomavirů s proteazomálním systémem hostitelských buněk Abstrakt: Virová čeleď Polyomaviridae obsahuje mimo modelových virů - myšího polyomaviru a viru SV40 také lidské patogeny, mezi něž patří i virus BK. Polyomaviry jsou malé viry, jejichž kapsida není obalená a jako genom nesou dvouřetězcovou molekulu DNA. Porozumění jejich životnímu cyklu je nezbytné pro jejich využití v genové terapii nebo imunoterapii stejně jako pro prevenci či léčbu jimi způsobených komplikací. Tato diplomová práce je zaměřena na studium časné fáze infekce MPyV a viru SV40, tedy hlavně na dopravu virového genomu do jádra a roli proteazomálního systému hostitelských buněk v této fázi. Bylo zjištěno, že blokace proteazómů specifickým inhibitorem vede ke zvýšení exprese časného nestrukturního proteinu LT, který byl zvolen jako marker vstupu viru do jádra a úspěšné virové exprese. Sledování vzájemné lokalizace proteazómů a proteinu VP1 MPyV a viru SV40 ukázalo 10% kolokalizaci zmíněných struktur. Dále bylo zjištěno, že proteazomální inhibitor MG-132 zásadním způsobem negativně ovlivňuje replikaci DNA, a to jak virové tak buněčné. Dalším cílem této práce bylo připravit antigen - unikátní část proteinu VP2 BK viru - na výrobu protilátky. Nejprve byl vytvořen expresní vektor s vloženým DNA fragmentem unikátní části VP2 BKV, za...

Interaction of polyomaviruses with proteasomal system of host cells Abstract: Viral family Polyomaviridae includes besides model organisms - mouse polyomavirus and SV40 virus, also human pathogens, for example, BK virus. Polyomaviruses are small non- enveloped viruses with double-stranded DNA. Understanding of their life cycle is important for their use in gene therapy and immunotherapy as well as for prevention and treatment of complications caused by these viruses. This thesis is focused on early phases of MPyV and SV40 infection studying, mainly on delivery of viral genome to nucleus and role of proteasomal system in this stage of infection. It was found out that inhibition of proteasomes by specific inhibitor leads to increase of early non-structural protein LT expression, which was chosen as marker for viral entry to the nucleus and successful viral expression. Relative localization of proteasomes and VP1 protein of MPyV and SV40 was monitored and it showed 10% colocalization of mentioned structures. Further, it was found out that proteasomal inhibitor MG-132 negatively influences the replication of both viral and cellular DNA. Next aim of this diploma thesis was to prepare antigen - unique part of VP2 protein of BKV - for producing antibody. Expression vector with inserted fragment of unique part of...