Vazba organických barviv na proteiny. Možnosti využití v rámci praktika z biochemie.

Abstract

V předložené bakalářské práci byla experimentálně ověřována možnost vytvoření nové úlohy pro pokročilé biochemické praktikum, tematicky zaměřené na studium vazby nízkomolekulární látky (barviva) na makromolekulu proteinu. Prvotním záměrem bylo v tomto směru modifikovat existující úlohu "Studium kinetiky dialýzy". Výsledky experimentů ale ukázaly, že fluorimetrické měření v podmínkách praktika je nedostatečně reprodukovatelné a měření absorbance málo citlivé. Proto byla vytvořena úloha nová: "Vazba bromfenolové modři na sérový albumin", ve které je studována stechiometrie této vazby pomocí tzv. Jobova výnosu. Po optimalizaci postupu byl vytvořen návod, který je přílohou této práce. Klíčová slova: fluorescein, bromfenolová modř, sérový albumin

In this submitted thesis the possibility of creating a new laboratory task for advanced practical courses in biochemistry, concerning the binding of a low-molecular compound (dye) to a protein macromolecule, was experimentally verified. First intention was to modify the existing task "Dialysis kinetics" with a binding of fluorescein to a protein. However, the experiments have proved, that fluorescence measurements of this kind are not reproducible in the conditions of practical courses laboratory and absorbance measurements have low sensitivity. Therefor a whole new task was created: "Binding of bromophenol blue to serum albumin", in which the stoichiometry of this binding is studied using so-called Job plot. After the optimization of procedure a laboratory task instructions were created, which are attached to this thesis. Keywords: fluorescein, bromophenol blue, serum albumin