Analýza a charakterizace antimikrobiálních peptidů kapilární elektroforézou

Abstract

Kapilární zónová elektroforéza (CZE) s UV-fotometrickou detekcí při vlnové délce 206 nm byla využita pro stanovení stupně chemické čistoty, meze detekce a meze stanovitelnosti antimikrobiálního kationického peptidu halictinu a jeho 25 analogů. Halictin a jeho analogy byly charakterizovány efektivními elektroforetickými pohyblivostmi korigovanými na 25 řC v několika kyselých základních elektrolytech. Separace směsí strukturně blízkých analog halictinu byly provedeny metodou kapilární zónové elektroforézy (CZE) a micelární elektrokinetické chromatografie (MEKC). Nejvyšších hodnot separační účinnosti, až 2,36∙105 teoretických pater na metr délky kapiláry, bylo dosaženo metodou CZE v základním elektrolytu obsahujícím 30 mM kyselinu fosforečnou, 25 mM Tris a přídavek kationického tenzidu 0,4 mM didodecyldimethylamoniumbromidu (DDAB), pH 2,85. Nejvyšší hodnoty rozlišení CZE separací peptidů byly nalezeny v základním elektrolytu složeném z 30 mM kyseliny fosforečné, 25 mM Tris s přídavkem 0,4 mM DDAB a 0,1 % (m/v) hydroxyelthylcelulosy, pH 2,84.

Capillary zone electrophoresis (CZE) with UV-photometric detection at 206 nm was used for the determination of degree of chemical purity, limit of detection and limit of quantitation of antimicrobial cationic peptide halictine and its 25 analogs. Halictine and its analogs were chracterized by their effective electrophoretic mobilities corrected to reference temperature 25 řC in several acidic background electrolytes. Separations of mixtures of structurally related analogs of halictine were performed by capillary zone electrophoresis (CZE) and micellar electrokinetic chromatography (MEKC). The highest values of separation effeciency, up to 2.36∙105 theoretical plates per meter, were achieved by CZE in the background elektrolyte containing 30 mM phosphoric acid, 25 mM Tris and additive of cationic surfactant 0.4 mM didodecyldimethylammonium bromide (DDAB), pH 2.85. The highest values of resolution of CZE separations of peptides were found in background electrolyte composed of 30 mM phosphoric acid, 25 mM Tris, 0.4 mM DDAB and 0.1 % (m/v) hydroxyethylcellulose, pH 2.84.