Studium potenciálu slepičích anti-peptidových protilátek jako prostředku profylaxe virových infekcí

Abstract

In 2020, the WHO declared a global pandemic due to the disease COVID-19, which is caused by the SARS-CoV-2 virus. This virus uses the binding of a surface 'spike' protein to the affected cell's ACE 2 receptor to enter the cell. Vaccination therefore aims at inducing the production of antibodies that inhibit the virus binding. Alternatively, antibodies can be obtained from other organism and used as a means of passive immunisation against COVID-19 disease. The aim of the work was therefore to prepare chicken antibodies, IgY, that would be able to prevent the virus from binding. For the preparation of peptide immunogens, appropriate amino acid sequences have been selected from the RBD domain of SARS-CoV-2 S1 protein, which interacts with the ACE 2 receptor. The synthesized peptides were coupled with the KLH protein carrier, and the resulting conjugate was used to immunize hens. Subsequently, the IgY produced was isolated from the egg yolks and their ability to recognise selected peptides in different types of antigens was demonstrated using the ELISA method. After that, the protective properties of antibodies against the virus were tested ex vivo in cell lines and their efficiency was compared to that of Remdesivir. The antibodies were able to inhibit virus binding to cells in the assays, but the...

V roce 2020 byla WHO vyhlášena celosvětová pandemie kvůli nemoci COVID-19, která je způsobovaná virem SARS-CoV-2. Tento vir využívá pro vstup do buňky navázání povrchového "spike" proteinu na ACE 2 receptor napadené buňky. Očkování se proto zaměřuje na navození produkce protilátek, které tuto vazbu inhibují. Alternativně je možno získat protilátky mimo hostitelský organismus a využít je jako prostředek pasivní imunizace proti nemoci COVID-19. Cílem práce proto bylo připravit slepičí protilátky, IgY, které by byly schopné bránit vazbě viru. Pro přípravu peptidových imunogenů byly vybrány vhodné sekvence aminokyselin ze struktury RBD domény S1 podjednotky viru SARS-CoV-2, která interaguje s ACE 2 receptorem. Syntetizované peptidy byly navázány na proteinový nosič KLH a vzniklým konjugátem byly imunizovány slepice. Následně byly vytvořené IgY izolovány z vaječného žloutku a za využití metody ELISA byla prokázána schopnost protilátek rozpoznat vybrané peptidy v různých typech antigenů. Poté byly ex vivo testovány protektivní vlastnosti protilátek proti viru v buněčných liniích a porovnány s účinností inhibice Remdesivirem. Protilátky byly při testech schopny inhibice vazby viru na buňky, ale výsledek testování byl ovlivněn nízkou počáteční koncentrací protilátek. Proto byla provedena afinitní...