Analýza sulfatovaných flavonoidů pomocí vysokotlaké kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí (LC-MS)

Abstract

Tato bakalářská práce je zaměřena na nalezení optimálních separačních podmínek ve vysokoúčinné kapalinové chromatografii pro analýzu sulfatovaných polyfenolických látek, především pak flavonoidů, fenolových kyselin a katecholů. Při vývoji metody byly použity tři chromatografické kolony. Kolona ZIC-HILIC v polárně organické fázi a kolony C18 a Kinetex PFP v reverzní fázi. Cílem optimalizace metody v rámci práce byl krátký čas separace, ostré nedeformující se píky a separace všech složek směsi. Při použití kolony Kinetex PFP se podařilo nalézt optimální metodu pro separaci testovaných směsí. Jako nejvhodnější se ukázalo použití mobilní fáze o složení 10 mM octanu amonného/0,1% kyseliny mravenčí a methanolu, při průtoku mobilní fáze rychlostí 0,6 ml/min. Modifikací gradientu mobilní fáze a teploty se podařilo separovat všechny složky testovaných směsí, píky byly ostré a čas separace se pohyboval ve většině případů do 10 min. Metoda je také přímo použitelná ve spojení s hmotnostním detektorem. Klíčová slova: Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC), flavonoidy, polyfenolické látky, sulfatace, separace

The aim of this work is to find the optimal separation conditions in high performance liquid chromatography for the analysis of sulfated polyphenolic substances, especially flavonoids, phenolic acids and catechols. Three chromatographic columns were used in the development of the method. ZIC-HILIC column with polar organic phase and C18 and Kinetex PFP columns with reverse phase. We focused in particular on a short time of separation, sharp tailless peaks and separation of all components of the mixture. Using a Kinetex PFP column, the optimal method for separating the test mixtures was found. The use of a mobile phase of 10 mM ammonium acetate/0,1% fromic acid and methanol was shown to be the most appropriate, with a mobile phase flow rate of 0,6 ml/min. By modifying the gradient and temperature, all components of the tested mixtures were separated, the peaks were sharp, and the separation time in most cases ranged do not exceed 10 min. The method is also directly applicable in conjunction with a mass detector. Keywords: High Performance Liquid Chromatography (HPLC), flavonoids, polyphenolic substances, sulfation, separation