Genová exprese v kuřecím embryu: mikromanipulační a vizualizační metody

Abstract

Cílem této dizertační práce bylo získat lepší vhled do principů vývoje buněčných struktur a orgánů v kuřecím embryu. K tomuto účelu byly zavedeny a k daným procedurám upraveny různé pokročilé metody manipulace a vizualizace in vitro, ex vivo, ex ovo a in ovo. Tyto specializované metody byly využity zejména ke studiu genové exprese ve vývoji neurální lišty a vývoji oka. Během dlouhodobého výzkumu v naší laboratoři byl pozorován vliv onkoproteinu v-Myb na vývoj neurální lišty a jeho schopnost měnit přirozený buněčný osud. Studovali jsme vliv proteinu v-Myb na změny v diferenciaci buněk neurální lišty, zejména jejich vývoj do melanocytární linie, a jeho vliv na expresi genů v neurální liště. Středem našeho zájmu se stal protein Gremlin 2, označovaný také jako PRDC (protein related to Dan and Cerberus), jehož expresi v-Myb v neurální liště zvyšuje. Zavedené postupy elektroporace neurální lišty in ovo byly upraveny pro transfekci buněk vyvíjejícího se oka a využity ke studiu genové regulace při indukci čočky. Výsledky získané na kuřecím modelu podpořily studii provedenou na myších embryích. Technika elektroporace do embryonálního oka byla také upravena pro mikromanipulace s retinou in ovo, která byla dále zpracována metodami ex vivo a in vitro pro studii zabývající se lokalizací snRNP ve...

The aim of this work was to obtain better insight into the principles of cell structures and organs in the chicken embryo development. To reach this goal special methods of micromanipulations and visualization in vitro, ex vivo, ex ovo and in ovo were implemented and adjusted. These methods were used to study gene expression in neural crest development and eye development. In the course of long term research in our laboratory we observed that oncoprotein v-Myb influences the development of the neural crest and has the capacity to change natural cell fate. We performed a series of experiments to investigate v-Myb protein influence on neural crest cells differentiation, especially melanocyte lineage development, and its influence on gene expression in the neural crest. Therefore we focused on Gremlin 2 (PRDC), the gene upregulated by v-Myb in the neural crest. The established procedure of electroporation in ovo was adjusted to transfect cells of the developing eye and used to study gene expression during lens induction. The results obtained from chicken embryo experiments endorsed the study performed on mouse embryos. Futhermore, the electroporation technique was slightly modified for manipulations of the neural retina in the developing eye in ovo. Thereafter, the retinas were processed ex vivo and...