Rekombinantní příprava DNA vazebné domény transkripčního faktoru TEAD1 pro studium jeho interakcí s DNA

Abstract

Proteiny TEAD patří do významné rodiny transkripčních faktorů, které se během vývoje organismu podílí na regulaci jeho růstu a diferenciace buněk prostřednictvím aktivace exprese nejrůznějších genů. Tato rodina sdílí dvě vysoce konzervovaná místa, a to TEA DNA vazebnou doménu, po které tyto proteiny získaly název, a doménu, pomocí níž transkripční faktory váží další koaktivátory. Protože TEAD proteiny nejsou samy o sobě schopné transkripce, interagují s řadou koaktivátorů, které umožňují regulovat transkripci požadovaného genu. Poruchou regulace aktivity TEAD proteinů může docházet ke vzniku nádorových onemocnění. Proto v dnešní době hrají proteiny rodiny TEAD nemalou roli při vývoji nových protinádorových léčiv. Jedním ze způsobů inhibice těchto proteinů je zabránění jejich vazbě na DNA, tedy blokace aktivního místa v DNA vazebné doméně. Tato bakalářská práce se zabývá rekombinantní expresí zmíněné DNA vazebné domény transkripčního faktoru TEAD1, která je prodloužená o aminokyseliny v nestrukturované oblasti. Po nalezení vhodných podmínek produkce bylo přistoupeno k produkci ve velkém objemu následované purifikací a ověřením identity proteinu. Nakonec byla potvrzena schopnost interakce produkovaného proteinu s DNA. Připravený protein bude tedy možné využít ke studiu způsobů jeho interakce s DNA,...

TEAD proteins belong to a significant family of transcription factors that contribute to the regulation of organism growth and cell differentiation during its development by activating the expression of a wide variety of genes. This family shares two highly conserved sites, the TEA DNA binding domain, after which the proteins have been named, and the domain by which transcription factors bind other coactivators. Because TEAD proteins are not able to activate transcription themselves, they interact with a number of coactivators. These coactivators allow the transcription of the gene of interest to be regulated. Failure of TEAD protein activity regulation can lead to cancer. Therefore, TEAD family proteins nowadays play an important role in the development of new anticancer drugs. One way of inhibiting these proteins is to block the active site in their DNA binding domain, thus, to block their binding to DNA. This bachelor thesis deals with recombinant expression of said DNA binding domain of transcription factor TEAD1, which is extended by amino acids in unstructured regions. After finding suitable conditions of protein production, we proceeded to large volume production which was followed by purification and protein identity verification. Finally, the ability of the produced protein to interact...