Nepřímé stanovení heparinu kapilární elektroforézou

Abstract

Heparin is a mixture of sulfonated polysaccharides which is negatively charged. Heparin is a substance which is important in organism and fundamentally affects its physiology. Main attribute of heparin is anticoagulation - it prevents the complete blood coagulation. This anticoagulant effect balances the hemocoagulation by influencing the coagulation pathway. In some cases a pharmacological application of heparin is needed so the heparin is administrated as a injection of physiological solution of sodium or calcium heparine salt. Monitoring of level of the heparin in blood is problematic - methods used today are based on the measurement of a time required for blood clot formation. The result evaluation is done by comparing a sample with reference solution. These methods are relatively imprecise, can not be used in "on-line" setting and are highly influenced by general health condition of patient. In this work some principles of affinity capillary electrophoresis were adapted from another work - heparin was determined indirectly by monitoring of decrease of the peak area of protamine. Protamine is medically used antidote of heparin because they create a stable complex together. In this work protamine was replaced by well defined tetraarginine because the most frequent amino acid in protamine is...

Heparin je směs sulfatovaných polysacharidů s negativním nábojem. Jde o látku, která je v organismu velmi důležitá a zásadním způsobem zasahuje do jeho fyziologie. Hlavní funkce heparinu v těle je protisrážlivá - zabraňuje tomu, aby došlo k úplnému sražení krve. Zásahem do koagulační kaskády jeho antikoagulační efekt vyrovnává hemokoagulační efekt. V některých případech je třeba do této rovnováhy zasáhnout farmakologicky, kdy se aplikuje heparin ve formě sodné nebo vápenaté soli ve fyziologickém roztoku jako antikoagulační přípravek. Sledování hladiny heparinu v krvi nebo plasmě má svá úskalí. Dodnes používané metody jsou založeny na jednoduchém principu měření času potřebného k vzniku sraženiny krve ve vzorku - vyhodnocení je prováděno vzhledem k porovnávacím roztokům. Tyto metody jsou relativně nepřesné, nedají se použít v "on-line" uspořádání a jsou velmi ovlivňovány celkovým zdravotním stavem pacienta. V rámci této práce byly převzaty a ověřeny některé ze základních principů metody afinitní kapilární elektroforézy, kde byl heparin sledován nepřímo pomocí úbytku píku protaminu. Protamin se používá jako antidotum heparinu, protože s ním tvoří stabilní komplex. V této práci byl složitější protamin nahrazen dobře definovaným tetraargininem, jelikož arginin je v protaminu nejhojněji zastoupená...