Vývoj elektroanalytických metod pro detekci cholesterolu a 7-dehydrocholesterolu

Abstract

The aim of this Thesis is development of electroanalytical methods for determination of cholesterol and 7-dehydrocholesterol on boron doped diamond electrodes based on electrochemical oxidation of products of acid-induced dehydration reaction. Two approches have been applied, relying on their detection in 0,1 mol.l-1 perchloric acid in acetonitril containing variable water content 0,43 % - 40 %. Cyclic voltammetry revealed substantial difference in oxidation peak pontecials for 7-dehydrocholesterol (+850 mV) and cholesterol (+1500 mV) in 0,1 mol.l-1 perchloric acid in acetonitrile containing 5 % of water. The limit of detection using differential pulse voltammetry were 6,19 µmol.l-1 a 19,2 µmol.l-1 for a mixture of 7-dehydrocholesterol and cholesterol, respectively. For flow injection analysis with amperometric detection (FIA-AD) the water content in run buffer, detection potencial and the distance between the capillary outlet and electrode surface in wall-jet arrangement of amerometric flow-through detection cell were optimized. Achieved detection limits are in range of 0,61 - 3,43 µmol.l-1 depending on the detection potencial and water concent in the run buffer. The developed FIA-AD method was used for determination of a model mixture solution of 7- dehydrocholesterol and cholesterol. Key words...

Cílem této práce je vývoj elektroanalytických metod pro stanovení cholesterolu a 7-dehydrocholesterolu s využitím borem dopované diamantové elektrody na základě elektrochemické oxidace produktů dehydratační reakce těchto sterolů. Byly zvoleny dva přístupy, kdy v obou případech detekce probíhala v prostředí 0,1 mol.l-1 kyseliny chloristé v acetonitrilu s obsahem vody 0,43 % - 40 %. Metodou cyklické voltametrie bylo zjištěno, že potenciál oxidačních signálů se pro oba steroly značně liší, v prostředí 0,1 mol.l-1 HClO4 v acetonitrilu s 5% obsahem vody byla zaznamenána proudová maxima u +850 mV pro 7- dehydrocholesterol a +1500 mV pro cholesterol. Metodou diferenční pulzní voltametrie byly určeny meze detekce 7-dehydrocholesterolu (6,19 µmol.l-1 ) a cholesterolu (19,2 µmol.l-1 ) ve směsi. Druhým přístupem je metoda průtokové injekční analýzy s ampérometrickou detekcí. Byl optimalizován obsah vody v nosném elektrolytu, detekční potenciál a vzdálenost elektrody od ústí kapiláry při wall-jet uspořádání průtokové detekční cely. Z koncentračních závislostí směsí 7-dehydrocholesterolu a cholesterolu a při různých detekčních potenciálech Edet byly určeny limity detekce 0,61 - 3,43 µmol.l-1 . Metoda průtokové injekční analýzy s elektrochemickou detekcí byla použita pro stanovení koncentrace cholesterolu a 7-...