Vývoj metody pro stanovení loadingu aminokyselin při syntéze peptidů na pevné fázi

Abstract

Byla vyvinuta jednoduchá metoda pro stanovení loadingu aminokyselin při syntéze peptidů na pevné fázi. Metoda je aplikovatelná na nejběžnější typ syntézy využívající chránicí skupiny FMOC a piperidinu jakožto deprotekčního činidla. Oba produkty deprotekce jsou separovány metodou HPLC a stanoveny pomocí UV detektoru za použití interního standardu. Metoda poskytuje pravdivé hodnoty, které byly ověřeny nezávislou metodou. Relativní směrodatná odchylka metody je 1,52 %. Metoda je výrazně přesnější než metody dosud publikované a umožnuje stanovení z odpadu syntézy. Díky použití interního standardu neklade nároky na přesnost ředění nebo známé objemy.

A simple method has been developed to determine amino acid loading in solid phase peptide synthesis. The method is applicable for the most common type of synthesis, which use FMOC as protective group and piperidine as a deprotecting agent. Both products of deprotection reaction are separated by HPLC and determined using an UV detector; an internal standard is added. The method gives true values that have been verified by an independent method. The RSD is 1.52%. The method is more accurate than the published methods and allows the determination from the waste of synthesis. The employing of the internal standard eliminated the necessity of dilution accuracy or known volumes.