High-performance chromatographic methods for determination of proteins

Abstract

High-performance chromatographic methods for determination of proteins Ab strakt disertačnípráce Praha,2006 Autor: Mgr. Tereza Vařilová Školitelé: Prof. RNDr.Věra Pacáková, CSc. (Katedra analýické chemie, Karlova Univerzita, Praha) Prof. Dr. Hans-Gerd Janssen (Unilever Research & Development, Nizozemí) Ana|ýza biologicky aktivních látek je rychle se rozvíjejícíobor, kteý tvoří důležitou část aplikací v analýické chemii. Mezi látkami jako jsou peptidy, hormony, léky a drogy tvoří proteiny důleŽitou skupinu bíologicky aktivních látek. Naročným úkolem je izo|ace, separace a identifikace iednotlivých složek složitýchsměsí (např. krevní sénrm). Pro t1to f{9|1z p2ií vysokoúčinnéchromatografické metody svénezastupitelné místo. Proteomika je dynamicky se rozvijejícía dtúežitávědní disciplína. Jejípokrok by nebyl možný bez r{rvoje v metodách analytických a preparativních separací. Komplexnost biologický.ch systémůklade velképoŽadavky na pouŽité metody. V současnosti se běžné vytlŽivá šest ruzných módů HPLC pro ana|ýzu proteinů: iontově qiměrurá chromatografie (IEC)' vylučovací(SEC), afinitní (ALC), chromatografie s hydrofobní interakcí (HIC), chronratograÍie na normální fazi (i.IPLC) a chromatografie na reverzni fázi (RPLC). Dva z těchto módů, konkrétně afinitní chromatograťte a vylučovacíchromatografie, byly...

Conclusions This Thesis gives an overview of high-performance riquid chromatography in various separation modes for a characterization of selected proteins. various affinity stationary phases were prepared for analysis of pepsin, seminal plasma proteins and selected glycoproteins' choice of the affinity system suitable for a particular purpose is always a comprex probrem in which number of aspects must be considered. properties of the proteins to be separated and ligands used had to be taken into an account. The separation system should not influence the biorogicai activity ofproteins separated. From this point of view it is clear that for any each individuar system is necessary to find specific conditions for I) immobilizationof ligand, and II) separation conditions. Stationary phases with immob'ized 3,5-diiodo-L-tyrosine exhibited sufÍicient selectivity, proved to be useful for analysis ofporcine pepsin A and are appricable to practical sampres of human pepsin' Reversed-phase crs corumn is suitable for anarysis ofpepsin fragments obtained after a-chymotrypsin digestion. A study oť interaction of various forms of pepsin and pepsinogen are essentiar because of their high importance as crinicar diagnostic markers and as stomach enzyme. "lA IŤ Aťfinity chromatography with heparin immobilized to Toyopearl...