Ellipsometry and fluorescence microscopy applied to model membranes

Abstract

7 Abstract The following PhD thesis presents two optical experimental techniques: ellipsometry and confocal fluorescence microscopy, and focuses on their applications in investigation of supported phospholipid bilayers (SPBs). The thesis presents two studies. First one shows real-time effects of ethanol on supported phospholipid bilayers formed by adsorption of phospholipid vesicles on solid surface measured by ellipsometry. This study first time demonstrated that ethanol-induced membrane interdigitation, as demonstrated for free standing bilayers, does not occur in the supported membranes. The finding indicates that membranes formed on supports, even fused into confluent bilayers, may differ from free-standing bilayer in vesicles. The second study is based on the combination of ellipsometry with two fluorescence microscopy techniques (i.e.Laser Scanning Microscopy and Z-Scan Fluorescence Correlation Microscopy) to gain information on the interaction of antimicrobial peptides with SPBs. These techniques were used to compare the mechanisms of interaction of the two different antimicrobial peptides α-helical Magainin 2 and β-sheet Cryptdin-4. LSM shows appearance of inhomogeneities in spatial distribution of lipids in the bilayer after treatment with Crp-4. Ellipsometric measurements show that binding of...

(in Czech): Nasledujícídisertačnípníce představuje dvě optické experimentá|ní techniky: elipsometrii a konfokáIní fluorescenčnímikroskopii, a zaměňlje se na jejich aplikace ve studiu podporovaných fosfolipidových dvojwstev (ang. Supported Phospholipid Bilayers - SPBr). Práce představuje dvě studie. První z nich ukazuje v reálném časeelipsometricky měřené účinkyethanolu na podporované fosfolipidové dvojwstvy vytvořené adsorpcí fosfotipidových váčkůna pevném povrchu. Tato sfudie poprvé prokráaala, ž.s v podporovaných membránach nedochází k ethanolem vyvolanému prolínáníhydrofobních ěástí obou vrstev membrány, pozorÓvanému u volně stojícíchdvojvrstev. Zjištěru naznačuje, žemembrány vytvořené na podložkách' byť spojené do souvislé dvojvrstvy, se mohou lišit od volně stojícíchdvojwstev ve vesikulách. Druhá studie je zaLoŽena na kombinaci technik elipsometrie a fluorescenění mikroskopie (laserová řádkovací mikroskopie (ang. Laser Scanning Microscopy - LSW a fluorescenčníkorelačníspektroskopie se skenováním v ose Z (ang. Z. scan Fluorescencje Correlation Spectroscopy Z.scan FCů)k získání informací o interakcí antimilaobiá|ních peptidů s SPBs. Tyto techniky byly používány k porovnání mechanismů interakce dvou různých antimikrobiálních peptidů cr-helikálního Magaininu 2 a Cryptdinu-4 (Crp-4) v konformaci...