Studium membránových transportních procesů u kvasinek pomocí potenciometrické fluorescenční sondy diS-C3(3)

Abstract

Název práce: Studium membránových transportních procesů u kvasinek pomocí potenciometrické fluorescenční sondy diS-C3(3) Autor: Tomáš Bartl Katedra / Ústav: Fyzikální ústav UK Vedoucí bakalářské práce: doc. RNDr. Dana Gášková, CSc., Fyzikální ústav UK Abstrakt: V membránách kvasinek existuje celá řada transportérů. Některé jsou zodpovědné za přísun živin do buněk, jiné za vylučování odpadních a cizorodých látek ven z buněk nebo za transport malých anorganických iontů a protonů přes membránu. V této práci byla studována činnost specifických transportních proteinů, tzv. MDR pump, které jsou zodpovědné za odstraňování cizorodých látek/léků z buněk. Pomocí série mutantních kmenů kvasinek Saccharomyces cerevisiae (AD12, AD1-3 a AD1-8) lišících se zastoupením jednotlivých MDR pump v jejich plazmatické membráně byl zkoumán vliv různých chemických látek na změnu intracelulární koncentrace potenciometrické fluorescenční sondy diS-C3(3), která je aktivně odstraňována z buněk některými z těchto pump. Sledováním účinku glukózy a 2-deoxyglukózy byl prokázán aktivní příspěvek nejenom hlavní MDR pumpy, Pdr5p, ale také dalších pump ke snižování intracelulární koncentrace sondy. Bylo zjištěno, že zatímco glukóza zvyšuje aktivitu těchto pump při odstraňování sondy z cytosolu, přidání 2-deoxyglukózy způsobuje naopak jejich...

1 Title: Study of membrane transport processes in yeast using potentiometric fluorescent probe diS-C3(3) Author: Tomáš Bartl Department: Institute of Physics of Charles University Supervisor: doc. RNDr. Dana Gášková, CSc., Institute of Physics of Charles University Abstract: Yeast membranes contain a number of transporters. Some are responsible for flow of nutrients to the inside of the cell, others for disposing of waste and foreign substances and some for transport of small ions or protons across the membrane. The focus of this work is on the activity of specific transport membrane proteins, so-called MDR pumps, which are responsible for transport of foreign substances or drugs, out of the cell. Using the series of mutant strains of the yeast Saccharomyces cerevisiae (AD1-3, AD1-8 and AD12) differentiated in the presence of specific MDR pumps in their membrane, an influence of various chemical substances on the intracellular concentration of the potentiometric fluorescent probe diS-C3(3), which is actively being transported out of the cell by some of the MDR pumps, was observed. By the examination of the effect of 2-deoxyglucose we proved the active contribution of not only the main MDR pump, Pdr5p, but also of some other pumps, in lowering the intracellular probe concentration. It was observed that...