Rekombinantní příprava jaderného antigenu proliferujících buněk (PCNA)

Abstract

Natural killer (NK) cells are cells of native immunity. Their task is to recognize and destroy tumor cells or, for example, viruses infected cells. NK cells use a number of surface receptors to recognize affected cells. These receptors may be activating, i.e., activate the cytotoxic response of NK cells leading to the induction of apoptosis in the target cell, or inhibitory ones, which, on the other hand, inhibit NK cell response. Whether a cytotoxic response occurs depends on both types of NK receptors. The NKp44 receptor belongs to the family of immunoglobulin receptors and it is one of the activating receptors. Its properties are very unique among other receptors. Other activating receptors of the immunoglobulin receptor family are NKp46 and NKp30. Recently, the interaction between the NKp44 receptor and the proliferating cell nuclear antigen (PCNA) has been described. PCNA is a clamp protein that plays a key role in DNA replication and repair as it anchors replication proteins. This work focuses on the production and optimization of a production of PCNA and on the preparation of expression vectors for the later production of NKp44 and NKp46. Interaction of NKp44 and PCNA will be investigated later. For the same reason, the expression vector for the NKp46 protein is also prepared in this work....

NK buňky (z anglického natural killer cells) jsou buňky přirozené imunity. Jejich úkolem je rozpoznávat a likvidovat nádorové nebo například viry infikované buňky. K rozpoznání takto postižených buněk slouží NK buňkám řada povrchových receptorů. Tyto receptory mohou být aktivační, které aktivují cytotoxickou odpověď NK buňky vedoucí k vyvolání apoptosy u cílové buňky, nebo inhibiční, které naopak tuto odpověď NK buněk inhibují. Zda dojde k vyvolání cytotoxické odpovědi záleží na obou typech NK receptorů. Receptor NKp44 patří do rodiny imunoglobulinových receptorů a je to jeden z aktivačních receptorů. Svými vlastnostmi je NKp44 velmi ojedinělý. Dalšími aktivačními receptory z rodiny imunoglobulinových receptorů jsou NKp46 a NKp30. V nedávné době byla popsána interakce mezi receptorem NKp44 a jaderným antigenem proliferujících buněk (PCNA) (z anglického proliferating cell nuclear antigen). PCNA je svorkový protein, který hraje klíčovou roli při replikaci a opravách DNA, neboť ukotvuje proteiny replisomu. Tato práce se zaměřuje na produkci proteinu PCNA a její optimalizaci, a na přípravu expresních vektorů pro pozdější produkci NK receptorů NKp44 a NKp46. Interakce tohoto proteinu se zmíněným receptorem bude zkoumána později. Ze stejného důvodu je připravován i expresní vektor pro protein NKp46....