Indukce a detekce senescence in vitro

Abstract

V dnešní době jsou, i přes neustálý pokrok novodobé medicíny a terapeutických metod, jedním z nejrozšířenějších a nejzávažnějších problémů nádorová onemocnění. Počet pacientů s nádorovým onemocněním každoročně vzrůstá a navzdory učiněným pokrokům minulých let v této oblasti moderní medicíny jsou tato onemocnění stále velmi špatně léčitelná. Předkládaná práce se zabývá indukcí a detekcí senescence vyvolané u dvou lidských buněčných linií, nádorové a nenádorové - lidské neuroblastomové buněčné linii UKF-NB-4 a lidské fibroblastové linii HDFn. Senescence byla indukována roztokem peroxidu vodíku anebo dlouhodobou kultivací. Detekce takto vyvolané senescence byla prováděna pomocí histochemického barvení X-Gal a rovněž vyhodnocením na základě morfologických změn buněk. V buněčné linii HDFn byly patrné senescentní buňky po obarvení kitem pro X-Gal. Podíl senescentních buněk stoupal s koncentrací peroxidu vodíku. V neuroblastomové linii nebyla senescence prokazatelná pomocí barvení kitem pro X-Gal, i když buňky ošetřené roztokem peroxidu vodíku vykazovaly morfologické rysy spojené se senescencí. Klíčová slova: senescence, peroxid vodíku, fibroblasty, neuroblasty, SA-β-Gal

Nowadays, despite the constant progress of modern medicine and therapeutic methods, one of the most widespread and most serious problems is cancer. The number of patients with cancer increases every year, and in spite of advances made in recent years in this field of medicine, it is still very difficult to find cure to these diseases. This thesis deals with the induction and detection of senescence on two different human cell lines, one cancer derived and one normal cell line, the human neuroblastoma cell line UKF-NB-4 and the human fibroblast line HDFn. Senescence was induced by different concentrations of hydrogen peroxide solution or by long-term cultivation. Senescent cells were detected by histochemical staining of X-Gal as well as evaluation based on morfological changes of the cells. In the HDFn cell line, senescent cells were detected using X-Gal kit. The number of senescent cells increased proportionaly with the concentration of hydrogen peroxide. In the neuroblastoma line, senescence was not detectable by X-Gal kit, although the cells treated withh hydrogen peroxide exhibited morphological features associated with senescence. Key word: senescence, hydrogen peroxide, fibroblasts, neuroblasts, SA-β-Gal