Optimalizácia elektroforetického stanovenia protamínu a inzulínu
Optimization of electrophoretic determination of protamine and insulin
Optimalizace elektroforetického stanovení protaminu a insulinu
bachelor thesis (DEFENDED)
![Document thumbnail](/bitstream/handle/20.500.11956/87656/thumbnail.png?sequence=7&isAllowed=y)
View/ Open
Permanent link
http://hdl.handle.net/20.500.11956/87656Identifiers
Study Information System: 184740
Collections
- Kvalifikační práce [19606]
Author
Advisor
Referee
Hraníček, Jakub
Faculty / Institute
Faculty of Science
Discipline
Chemistry
Department
Department of Analytical Chemistry
Date of defense
14. 6. 2017
Publisher
Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakultaLanguage
Slovak
Grade
Excellent
Keywords (Czech)
Kapilárna elektroforéza, protamín, inzulínKeywords (English)
Capillary zone electrophoresis, protamine, insulinTáto práca sa venuje optimalizácií stanoveniu protamínu a inzulínu pomocou kapilárnej zónovej elektroforézy. Počas experimentov sa optimalizovalo zloženie základného elektrolytu, jeho pH a spôsob dávkovania. Postupne sa vyskúšala kyselina citrónová v rozsahu koncentrácie 80 až 240 mmol l-1 a kyselina chlóroctová v rozsahu 50 mmol l-1 až 150 mmol l-1 . Optimalizovaná metóda používa kremennú kapiláru s vnútorným priemerom 50 μm. Celková dĺžka kapiláry je 50,0 cm, efektívna dĺžka je 8,5 cm. Dávkovanie vzorky prebieha na krátkom konci kapiláry. Základným elektrolytom je 100 mmol l-1 kyselina chlóroctová. Separácia prebieha pri napätí 20 kV. Vzorka je dávkovaná hydrodynamicky tlakom 5 kPa na 3 s. Detekcia prebieha pri vlnovej dĺžke 200 nm. Metódou je možné stanoviť protamín a inzulín v rozsahu koncentrácií 4 μg ml-1 až 300 μg ml-1 a 5 μg ml-1 až 300 μg ml-1 . Medza detekcie pre protamín je 1 μg ml-1 a pre inzulín 2 μg ml-1 . Opakovateľnosti plôch píkov a migračných časov s hydrodynamickým dávkovaním pre koncentrácie 30 μg ml-1 a 200 μg ml-1 vykazujú hodnoty relatívnych smerodajných odchýlok neprevyšujúce 6 % z čoho plynie, že optimalizovaná metóda vykazuje uspokojivú opakovateľnosť. Počas elektrokinetického dávkovania sa použilo napätie 5 kV po dobu 5 s. Elektrokinetické dávkovanie je menej presné, ale...
This work deals with optimization of a method for separation and detection of protamine and insulin using capillary zone electrophoresis. The composition of background electrolyte, the solution pH and the injection method were optimized. Citric acid in a concentration range of 80 to 240 mmol L-1 and chloroacetic acid ranging from 50 to 150 mmol L-1 were tested sequentially. The optimized method uses a fused silica capillary with inner diameter of 50 μm. The total length of capillary is 50.0 cm, effective length is 8.5 cm. The injection of the sample is performed on the short end of the capillary. The method uses chloroacetic acid of 100 mmol L-1 concentration as the background electrolyte. Driving voltage is 20 kV. Sample is injected hydrodynamically with a pressure of 5 kPa for 3 s. The analytes are detected spectrophotometrically at wavelength of 200 nm. The method allows for determination in case of protamines in concentration range between 4 μg mL-1 and 300 μg mL-1 and insulin from 5 μg mL-1 to 300 μg mL-1 . The limits of detection are 1 μg mL-1 for protamine and 2 μg mL-1 for insulin. Repeatability of migration times and peak areas tested at 30 μg mL-1 and 200 μg mL-1 concentration levels using hydrodynamic injection showed values of relative standard deviation lower than 6 % suggesting...