Show simple item record

Preparation of glutamate carboxypeptidase III using mammalian expression system
dc.contributor.advisorKonvalinka, Jan
dc.creatorŠimonová, Lenka
dc.date.accessioned2017-08-29T09:58:24Z
dc.date.available2017-08-29T09:58:24Z
dc.date.issued2017
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/20.500.11956/87653
dc.description.abstractRole glutamátkarboxypeptidasy II v savčím organismu je již poměrně dobře prozkoumaná, avšak o jejím homologu - glutamátkarboxypeptidase III - je známo jen minimum informací. Pro strukturní a funkční charakterisaci proteinu je zapotřebí velké množství proteinu, který je možno získat expresí v tkáňových kulturách. Vlastnosti proteinu mohou být ovlivněny posttranslačními mo- difikacemi, přičemž různé organismy provádějí různé posttranslační modifikace. Proto jsme se rozhodli vyvinout systém pro produkci rekombinantního GCPIII v savčích buňkách. Nejprve byl zaveden savčí expresní systém HEK 293-6E jako náhrada dosavadního hmyzího ex- presního systému. Výhodou tohoto savčího expresního systému je jeho snadná kultivace v suspenzních podmínkách a možnost transientní transfekce. Dále byly optimalizovány transfekční podmínky pro tento systém pomocí exprese zeleného fluorescenčního proteinu, pro snadnou detekci pomocí průtokové cyto- metrie. DNA kódující extracelulární část myší GCPIII (mEXSTII) byla klonována do pěti různých expres- ních plasmidů s použitím různých značek pro afinitní chromatografii (polyhistidinová kotva nebo tzv. Fc značka) na N- nebo C-konci připravovaného proteinu. Připravenými plasmidy byly transfekovány buňky. Pomocí imunochemické detekcce byla v médiích testována přítomnost...cs_CZ
dc.description.abstractThe role of glutamate carboxypeptidase II in mammalian organism is already known quite well but only little is known about its homologue glutamate carboxypeptidase III. For structural and functional characterization of any protein, a large amount of protein is required. Protein could be obtained by expression in tissue culture. Properties of the protein may be affected by post translational modifications, where different organisms create different modifications. Therefore, we set to develop a system for recombinant expression of GCPIII in mammalian cells. First the mammalian expression system HEK 293-6E was introduced as a substitute for the current insect expression system. The advantage of this mammalian expression system is its option of transient transfection and that it is easy to cultivate cells under suspension conditions. Further, transfection conditions for this system were optimized by green fluorescent protein expression, for easy detection by flow cytometry. DNA encoding the extracellular part of mouse GCPIII (mEXSTII) was cloned into five expression plasmids with His or Fc tags attached to N- or C-termini. Cells were transfected with prepared plasmids. The presence of mEXSTII in media was tested using Western blot and subsequently the activity of GCPIII was tested by cleaving its...en_US
dc.languageČeštinacs_CZ
dc.language.isocs_CZ
dc.publisherUniverzita Karlova, Přírodovědecká fakultacs_CZ
dc.subjectGCPIIIen_US
dc.subjectglutamate carboxypeptidase IIIen_US
dc.subjectHEK 293-6Een_US
dc.subjectprotein expressionen_US
dc.subjectmammalian expression systemen_US
dc.subjectGCPIIIcs_CZ
dc.subjectglutamátkarboxypeptidasa IIIcs_CZ
dc.subjectHEK 293-6Ecs_CZ
dc.subjectexprese proteinůcs_CZ
dc.subjectsavčí expresní systémcs_CZ
dc.titlePříprava glutamátkarboxypeptidasy III v savčím expresním systémucs_CZ
dc.typebakalářská prácecs_CZ
dcterms.created2017
dcterms.dateAccepted2017-06-14
dc.description.departmentDepartment of Physical and Macromolecular Chemistryen_US
dc.description.departmentKatedra fyzikální a makromol. chemiecs_CZ
dc.description.facultyPřírodovědecká fakultacs_CZ
dc.description.facultyFaculty of Scienceen_US
dc.identifier.repId172239
dc.title.translatedPreparation of glutamate carboxypeptidase III using mammalian expression systemen_US
dc.contributor.refereeObšil, Tomáš
thesis.degree.nameBc.
thesis.degree.levelbakalářskécs_CZ
thesis.degree.disciplineChemistryen_US
thesis.degree.disciplineChemiecs_CZ
thesis.degree.programChemistryen_US
thesis.degree.programChemiecs_CZ
uk.faculty-name.csPřírodovědecká fakultacs_CZ
uk.faculty-name.enFaculty of Scienceen_US
uk.faculty-abbr.csPřFcs_CZ
uk.degree-discipline.csChemiecs_CZ
uk.degree-discipline.enChemistryen_US
uk.degree-program.csChemiecs_CZ
uk.degree-program.enChemistryen_US
thesis.grade.csVýborněcs_CZ
thesis.grade.enExcellenten_US
uk.abstract.csRole glutamátkarboxypeptidasy II v savčím organismu je již poměrně dobře prozkoumaná, avšak o jejím homologu - glutamátkarboxypeptidase III - je známo jen minimum informací. Pro strukturní a funkční charakterisaci proteinu je zapotřebí velké množství proteinu, který je možno získat expresí v tkáňových kulturách. Vlastnosti proteinu mohou být ovlivněny posttranslačními mo- difikacemi, přičemž různé organismy provádějí různé posttranslační modifikace. Proto jsme se rozhodli vyvinout systém pro produkci rekombinantního GCPIII v savčích buňkách. Nejprve byl zaveden savčí expresní systém HEK 293-6E jako náhrada dosavadního hmyzího ex- presního systému. Výhodou tohoto savčího expresního systému je jeho snadná kultivace v suspenzních podmínkách a možnost transientní transfekce. Dále byly optimalizovány transfekční podmínky pro tento systém pomocí exprese zeleného fluorescenčního proteinu, pro snadnou detekci pomocí průtokové cyto- metrie. DNA kódující extracelulární část myší GCPIII (mEXSTII) byla klonována do pěti různých expres- ních plasmidů s použitím různých značek pro afinitní chromatografii (polyhistidinová kotva nebo tzv. Fc značka) na N- nebo C-konci připravovaného proteinu. Připravenými plasmidy byly transfekovány buňky. Pomocí imunochemické detekcce byla v médiích testována přítomnost...cs_CZ
uk.abstract.enThe role of glutamate carboxypeptidase II in mammalian organism is already known quite well but only little is known about its homologue glutamate carboxypeptidase III. For structural and functional characterization of any protein, a large amount of protein is required. Protein could be obtained by expression in tissue culture. Properties of the protein may be affected by post translational modifications, where different organisms create different modifications. Therefore, we set to develop a system for recombinant expression of GCPIII in mammalian cells. First the mammalian expression system HEK 293-6E was introduced as a substitute for the current insect expression system. The advantage of this mammalian expression system is its option of transient transfection and that it is easy to cultivate cells under suspension conditions. Further, transfection conditions for this system were optimized by green fluorescent protein expression, for easy detection by flow cytometry. DNA encoding the extracellular part of mouse GCPIII (mEXSTII) was cloned into five expression plasmids with His or Fc tags attached to N- or C-termini. Cells were transfected with prepared plasmids. The presence of mEXSTII in media was tested using Western blot and subsequently the activity of GCPIII was tested by cleaving its...en_US
uk.file-availabilityV
uk.publication.placePrahacs_CZ
uk.grantorUniverzita Karlova, Přírodovědecká fakulta, Katedra fyzikální a makromol. chemiecs_CZ


Files in this item

Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail

This item appears in the following Collection(s)

Show simple item record


© 2017 Univerzita Karlova, Ústřední knihovna, Ovocný trh 560/5, 116 36 Praha 1; email: admin-repozitar [at] cuni.cz

Za dodržení všech ustanovení autorského zákona jsou zodpovědné jednotlivé složky Univerzity Karlovy. / Each constituent part of Charles University is responsible for adherence to all provisions of the copyright law.

Upozornění / Notice: Získané informace nemohou být použity k výdělečným účelům nebo vydávány za studijní, vědeckou nebo jinou tvůrčí činnost jiné osoby než autora. / Any retrieved information shall not be used for any commercial purposes or claimed as results of studying, scientific or any other creative activities of any person other than the author.

DSpace software copyright © 2002-2015  DuraSpace
Theme by 
@mire NV