Působení inhibitorů V-ATPasy na chemorezistentní linie neuroblastomu in vitro

Abstract

Nádorová onemocnění se řadí mezi nejčastější příčiny úmrtí na celém světě a přes velký pokrok v léčebných postupech v posledních padesáti letech se stále jedná o závažný zdravotní problém. Proto je stále soustředěno velké úsilí na vývoj nových protinádorových léků a terapeutických přístupů. Neuroblastom (NBL) je nejčastější nádorové onemocnění u kojenců a čtvrté nejčastější u dětí. Úspěšnou léčbu značně komplikuje jeho heterogenita. Při chemoterapii je nežádoucím jevem léková rezistence. Jedním z mechanismů chemorezistence je akumulace slabě bazických protinádorových léčiv v lysosomech. Tato práce se zabývá měřením lysosomálního "uptaku" těchto látek v neuroblastomových buněčných liniích UKF-NB-4 a této linii rezistentní vůči ellipticinu (UKF-NB-4ELLI ) za různých podmínek. Byla zavedena metoda stanovení kapacity (objemu) buněčných lysosomů pomocí měření intenzity fluorescence barviva specifického pro lysosomy, LysoTracker Red (LTR), a dále byla zkoumána schopnost bafilomycinu A, inhibitoru vakuolární ATPasy (V-ATPasy), potencovat účinky ellipticinu inhibicí jeho lysosomální akumulace. Klíčová slova: neuroblastom, lysosom, vakuolární ATPasa, víceléková rezistence

Tumor diseases are one of the most common causes of death worldwide. Despite the great advances in therapy in the last fifty years, this is still a serious health problem. Therefore, great efforts are still concentrated on development of new anti-cancer drugs and therapeutic approaches. Neuroblastoma (NBL) is the most common tumor in infants and the fourth most common in children. Successful treatment is greatly complicated by its heterogeneity. Chemoresistance is an undesirable phenomenon of chemotherapy. One of the chemoresistance mechanisms is the accumulation of weakly basic anticancer drugs in lysosomes. This work deals with the measurement of lysosomal uptake of these compounds in neuroblastoma cell lines UKF-NB-4 and derived, ellipticine-resistant, line (UKF-NB- 4ELLI ) under different conditions. A method for determining the cell lysosomal capacity (volume) by measuring fluorescence intensity of lysosome-specific LTR dye was introduced and the ability of bafilomycin A, a V-ATPase inhibitor, to potentiate the effects of an anticancer agent ellipticine by inhibiting its lysosomal accumulation was investigated. Keywords: neuroblastoma, lysosome, vacuolar ATPase, multidrug resistance