Sulfobutylether-β-cyklodextrin jako chirální selektor pro separace aminokyselin a dipeptidů v HPLC

Abstract

Předkládaná diplomová práce je zaměřena na přípravu nové chirální stacionární fáze (CSF) dynamickým "coatingem" sulfobutylether-β-cyklodextrinu (SBE-β-CD) na iontově výměnnou stacionární fázi (SF) a otestování separačních schopností, selektivity a stability této CSF. Pro zjištění těchto parametrů byly použity achirální a chirální sady analytů. Dalším testovaným separačním systémem bylo použití C18 SF s přídavkem SBE-β-CD jako chirálního selektoru (CS) do mobilní fáze (MF). Sada testovacích chirálních analytů obsahovala aminokyseliny fenylalanin, tyrosin, tryptofan, jejich deriváty a dipeptidy glycyl-DL-tryptofan a glycyl-DL- fenylalanin. Pro studium selektivity pomocí achirálních analytů byly vybrány čtyři sady blokovaných a neblokovaných dipeptidů. Dipeptidy ve směsi byly tvořeny stejnými aminokyselinami, avšak s obráceným pořadím. Směs byla tvořena dvěma dipeptidy, např. H-alanylfenylalanin-OH/H-fenylalanylalanin-OH. Pro analýzu byl použit reverzní mód vysokoúčinné kapalinové chromatografie (RP-HPLC) a hydrofilní interakční kapalinová chromatografie (HILIC). Mobilní fáze byly tvořeny: (i) MeOH/deionizovaná voda, (ii) MeOH/kyselina mravenčí (pH 2,10), (iii) MeOH/20mM octan amonný (pH 4,70) a (iv) MeOH/10mM octan amonný (pH 8,80) v různých objemových poměrech. Připravená SBE-β-CD CSF byla vhodnější...

The main aim of this work was to prepare and characterize a new chiral stationary phase (CSP). The CSP was prepared by dynamic coating of sulfobutylether- β-cyclodextrin (SBE-β-CD) on a strong anion-exchange stationary phase (SP). The selectivity and stability of the newly prepared CSP were tested on the sets of chiral and achiral analytes. The next separation system used was composed of C18 SP with the addition of SBE-β-CD as a chiral selector into the mobile phase. The set of chiral analytes contained amino acids phenylalanin, tyrosine, tryptophan, their derivatives and dipeptides glycine-DL-tryptophan and glycine-DL- phenylalanin. Four groups of mixtures of blocked and unblocked dipeptide isomers were tested for achiral separations. Dipeptides used for the mixtures had the same molecular formula but the sequence of amino acids was reversed. Measurements were carried out in reversed phase separation mode and hydrophilic interaction liquid chromatography. Mobile phases composed of methanol as an organic modifier and four different aqueous parts: (i) deionized water, (ii) aqueous solution of formic acid (pH 2.10), (iii) 20mM ammonium acetate buffer (pH 4.70) and (iv) 10mM ammonium acetate buffer (pH 8.80) in various volume ratios. Newly prepared SBE-β-CD CSP was more suitable for separations of...