Uloha kataninu, ATPázy štěpící mikrotubuly, při modulaci buněčné motility a proliferace glioblastomových buněk.

Abstract

Glioblastomy jsou nejčastější a nejzhoubnější typy nádorů mozku. Pro svůj agresivní charakter jsou tyto nádory neléčitelné konvenčními terapeutickými přístupy. Bylo prokázáno, že v buněčných liniích glioblastomů i v glioblastomech je zvýšená exprese nekterých mikrotubulárních proteinů, zejména βIII-tubulinu, γ-tubulinu, a spastinu; proteinu štěpícího mikrotubuly. Tato diplomová práce je zaměřená na expresi, buněčnou distribuci a funkci kataninu, dalšího proteinu, který štěpí mikrotubuly, v glioblastomových buněčných liniích. Katanin má katalytickou (p60) a regulační (p80) podjednotku. Exprese a buněčná lokalizace obou podjednotek byla studována na panelu lidských glioblastomových liniích izolovaných z glioblastomů dospělých (T98G, U87MG, U118MG a U138 MG) nebo dítěte (KNS42). V porovnání s netransformovanými lidskými astrocyty byla zvýšená exprese obou podjednotek kataninu jak na úrovni transkriptu tak i proteinu v buněčných liniích T98G, U87MG a KNS42, nikoli však v liniích U138MG a U118MG. Immunofluorescenční mikroskopie ukázala difuzní distribuci obou podjednotek kataninu v celé buňce, jejich koncentraci na pólech dělícího vřeténka mitotických buněk a na vedoucím okraji u migrujících buněk. Podle výsledků měření buněčné migrace, koreluje rychlost migrace glioblastomových buněk s mírou exprese...

Glioblastomas are the most common and the deadliest types of brain tumours. Due to their highly invasive behaviour, they are incurable by convencial therapeutical strategies. It was shown that some components of microtubules, namely class III β-tubulin, γ-tubulin and microtubule severing protein spastin are overexpressed in glioblastoma cell lines as well as glioblastomas. This diploma thesis is focused on the expression, subcellular distribution and function of katanin, another microtubule-severing enzyme, in gliobastoma cell lines. Katanin is formed by catalytic (p60) and regulatory (p80) subunits. Expression and cellular localization of both katanin subunits was studied in panel of human glioblastoma cell lines isolated form adults (T98G, U87MG, U118MG and U138 MG) and child (KNS42). Data presented in this thesis demonstrated that katanin subunits were overexpresed both on transcript and protein levels in T98G, U87MG and KNS42 cell lines, but not in U138MG and U118MG cell lines when compared to normal non- transformed human astrocytes. Immunofluorescence microscopy revealed that both katanin subunits were diffusively distributed in cytoplasm and concentrated on spindle poles of mitotic cells and on leading edges of migrating cells. Examination of cell motility revealed that velocities in...