Charakterizace glykoforem haptoglobinu v lidském séru

Abstract

Charakterizace glykoforem haptoglobinu v lidském séru Petra Darebná (Katedra biochemie, Přírodovědecká fakulta, Univerzita Karlova v Praze, Česká republika) Změny v glykosylaci proteinů jsou spojovány s nádorovými onemocněními, především s hepatocelulárním a kolorektálním karcinomem. Tato práce se zabývá využitím na datech nezávislé analýzy pomocí iontově cyklotronové rezonance s Fourierovou transformací a tandemové hmotností spektrometrie s kapalinovou chromatografií a sledováním více reakcí ke kvantifikaci těchto změn u hepatocelulárního karcinomu, kolorektálního karcinomu a kolorektálního karcinomu s metastázemi do jater. V první fázi projektu byl haptoglobin směsných sér pacientů s hepatocelulárním karcinomem, kolorektálním karcinomem a kolorektálním karcinomem s metastázemi nabohacen pomocí hemoglobinu, imobilizovaného na aktivovanou CNBr Sepharosu 4B a následně purifikován pomocí vysokotlaké kapalinové chromatografie. Jednotlivé glykopeptidy haptoglobinu byly analyzovány pomocí iontově cyklotronové rezonance s Fourierovou transformací. V druhé fázi projektu byla použita pro analýzu změn glykosylace v závislosti na různém nádorovém onemocnění séra jednotlivých pacientů, u nichž byl částečně depletován albumin pomocí etanolového srážení. Jednotlivé fukosylované glykoformy N-glykopeptidů...

Characterization of haptoglobin glycoforms in human serum Petra Darebná (Katedra biochemie, Přírodovědecká fakulta, Univerzita Karlova v Praze, Česká republika) Changes in glycosylation of proteins are associated with several types of cancer, including hepatocelular carcinoma and colorectal carcinoma. This project deals with data independent analysis using ion cyclotron resonance with Fourier transform and tandem mass spectrometry with liquid chromatogramy and multiple reaction monitoring to quantify these changes in hepatocelular cancinoma and colorectal carcinoma with liver metastases. In the first part of the project the haptoglobin was enriched from pooled serum samples of pacients with hepatocellular carcinoma, colorectal cancer and colorectal carcinoma with metastases using hemoglobin immobilized on CNBr-activated Sepharose 4B and then purified by high pressure liquid chromatography. Individual haptoglobin glycopeptides were analyzed using ion cyclotron resonance with Fourier transform. In the second part of the project we analyzed changes in glycosylation depending on diferent tumor diseases in partially depleted serum of individual patients using ethanol precipitation. Individual fucosylated glycoforms of N-glycopeptides of serum proteins were compared with their nonfucosylated forms. In...