Význam V-ATPasy v rezistenci k cytostatikům a možnosti její inhibice

Abstract

Onkologická onemocnění patří mezi nejzávažnější problémy moderní medicíny a jejich výskyt se neustále zvyšuje. Neuroblastom je maligní embryonální nádor dětského věku, vznikající z periferního nervového systému a je to nejčastější nádor u kojenců. I přes významný vývoj léčebných metod v posledních letech zůstává toto onemocnění obtížně léčitelné. K léčbě tohoto nádoru se využívá chirurgická léčba, radioterapie a chemoterapie s použitím cytostatik. Cytostatika, jako je doxorubicin, cisplatina či ellipticin, se stala velmi významná v léčbě zhoubných nádorů. Avšak jednou z největších komplikací chemoterapie je vznik lékové rezistence. Tato práce se zabývá studiem vakuolární H+ -ATPasy (V-ATPasy), která hraje důležitou roli v tvorbě lékové rezistence. Jedná se o protonovou pumpu potřebnou pro acidifikaci vakuol. Senzitivní neuroblastomová buněčná linie (UKF-NB-4) a linie rezistentní vůči doxorubicinu, ellipticinu a cisplatině (UKF-NB-4DOXO , UKF-NB-4ELLI a UKF-NB-4CDDP ) byly vystaveny působení těchto cytostatik. Ovlivnění exprese proteinu V-ATPasy bylo sledováno imunochemicky, metodou Western blot a exprese na genové úrovni pomocí kvantitativní reverzně transkripční polymerasové řetězové reakce (RT-PCR). Ellipticin indukuje zvýšení exprese V-ATPasy v neuroblastomových buňkách jak na proteinové, tak na...

Cancers belong among the most serious problems of modern medicine and their occurrence is constantly increasing. Neuroblastoma is a malignant embryonal tumor in children, emerging from the peripheral nervous system and is the most frequent tumor in infants. Despite the significant development of therapeutic methods during recent years, this disease remains difficult to treat. It is treated surgically and also with chemotherapy using cytostatic drugs. The cytostatic drugs such as doxorubicin, ellipticine, cisplatin and vincristine have become very significant in treating cancer. However, they induced drug resistance in these neuroblastoma cells. This study investigates expression of the vacuolar H+ -ATPase (V-ATPase), in neuroblastoma cells and its role in the development of drug resistance. V-ATPase is a proton pump required for the acidification of vacuoles, as a sensor of cytosolic pH. A sensitive neuroblastoma cell line (UKF-NB-4) and cells resistant to doxorubicin, ellipticine and cisplatin (UKF-NB-4DOX , UKF-NB-4ELLI , UKF-NB-4CDDP ) were exposed to these agents and the expression of the V-ATPase was studied by Western blot analysis and real-time quantitative reverse tarnscription polymerase chain reaction (RT-PCR). Ellipticine induces an increase in expression of the V-ATPase in neuroblastoma...