Prolaktín a cirkulujúce monocyty - význam a funkcia v patogenéze T1DM. Štúdia in vitro

Abstract

Úvod: Diabetes mellitus 1. typu (T1DM) je autoimunitní onemocnění charakterizované absolutním deficitem inzulínu. Na patogenezi onemocnění se mimo jiné podílí mechanismy vrozené imunity a jsou zapojeny také monocyty. Ty lze na základě exprese CD14 a CD16 povrchových markerů klasifikovat do tří subtypů s odlišnou funkcí. Monocyty na svém povrchu kromě dalších markerů exprimují prolaktinový receptor (PRLR) a toll-like receptory (TLR), které indukují zánětlivé reakce, a navíc produkují mimohypofyzární prolaktin (PRL), jenž ovlivňuje imunitní odpověď. Cílem práce bylo sledovat vliv exogenního PRL na imunitní reakce monocytů a pokusit se odhalit jeho možnou úlohu v patogenezi T1DM. Materiál a metody: In vitro kultivace a stimulace monocytů 10 zdravých kontrol a 10 pacientů s T1DM. Jako stimulační agens byly použity PRL ve dvou dávkách a/nebo lipopolysacharid (LPS). Pro sledování hladin mRNA cytokinů TNF-α, IL-6, IRF-1, FOS byla celková RNA izolovaná z monocytů získaných imunomagnetickou separací z periferní krve kvantifikována pomocí Real Time PCR. Exprese vybraných povrchových markrů CD14, CD16 a PRLR byla detekována pomocí průtokové cytometrie. Pro detekci polymorfismů Asp299Gly a Thr399Ile v genu TLR4 jsme použili metodu PCR-RFLP s enzymy Nco1 a Hinf1. Závěr: Získaná data naznačují, že PRL...

Introduction: Type 1 diabetes mellitus (T1DM) is characterized by an absolute deficiency of the insulin-producing beta cells of the islets of Langerhans in the pancreas. Among mechanisms that lead to pathogenesis of T1DM, innate immunity including key cells monocytes are involved. Based on expression of CD14 and CD16 surface markers, monocytes are classified into three subtypes with different functions. In addition to other markers, monocytes express on their surface prolactin receptor (PRLR) and toll-like receptors (TLR), which induce inflammatory responses, and produce extrapituitary hormone prolactin (PRL) that affects immune response. The aim of thesis was to study an effect of exogenous prolactin on the immune responses of monocytes and to try to detect its possible role in the pathogenesis of T1DM. Material and Methods: In vitro cultivation and stimulation of monocytes derived from 10 patients with T1DM and 10 healthy controls. As stimulating agents were used PRL and/or lipopolysacharide (LPS). For determination of mRNA levels of the studied cytokines (TNF-α, IL-6, FOS, IRF-1), total RNA isolated from monocytes acquired by immunomagnetic separation has been quantified by using Real Time PCR. The expression of surface markers (CD14, CD16, PRLR) was detected by flow cytometry. For detection of...