Morfiem navozené změny membránových a solubilních bílkovin frontální mozkové kůry potkana

Abstract

The aim of this Ph.D. thesis was to analyze the morphine-induced changes of frontal brain cortex protein composition in rats exposed to increasing doses of morphine (10-50 mg/kg) for prolonged period of time (10 days). The first part of this work was oriented to the analysis of the phenomenon of hypersensitization/superactivation of adenylyl cyclase (AC), which is regarded as one of the crucial molecular mechanisms causing drastic pathological consequences of drug addiction. The increase of AC activity represents a "compensatory" response and is functionally related to the desensitization of G protein response to prolonged morphine exposure of target cells. The clear desensitization of µ-OR- and δ-OR-stimulated G protein response by morphine was demonstrated in our laboratory by analysis of the dose-response curves of DAMGO and DADLE-stimulated, high-affinity [35 S] GTPγS binding in plasma membranes isolated from frontal brain cortex of rats exposed to morphine according to the same protocol as that used in my Ph.D. thesis (10-50 mg/kg, 10 days). The κ-OR-stimulated [35 S] GTPγS binding was unchanged. It has been determined the amount of all AC isoforms (AC I-IX) in plasma membranes (PM) isolated from control and morphine-treated rats which were sacrificed 24 hours since the last dose of morphine....

Cílem této dizertační práce bylo analyzovat změny indukované morfiem ve složení proteinů frontální mozkové kůry potkanů vystavených zvyšujícím se dávkám morfia po dobu 10 dní (10-50 mg/kg). První část práce byla zaměřena na fenomén superaktivace/hypersenzitizace adenylylcyklázy (AC), který je považován za jeden z klíčových molekulárních mechanismů podílejících se na vzniku patologických důsledků drogové závisloti. Vzestup aktivity AC představuje kompenzační odezvu funkčně spojenou se snížením odpovědi G proteinů vlivem dlouhodobé expozice morfiu. Výsledky naší pracovní skupiny již dříve prokázaly desenzitizaci odpovědi G proteinů při stimulaci opioidních receptorů (OR) agonisty DAMGO (µ-OR) a DADLE (δ-OR). Funkční aktivita G proteinů byla měřena pomocí vazby [35 S] GTPγS ve frakcích plazmatických membrán (PM) izolovaných z frontální mozkové kůry potkanů vystavených zvyšujícím se dávkám morfia podle stejného protokolu, jaký je uveden v této práci (10-50 mg/kg, 10 dní). κ-OR-stimulovaná vazba [35 S] GTPγS se nezměnila. Byl stanoven obsah všech typů izoforem AC (AC I-IX) ve frakcích PM izolovaných z potkanů ovlivněných morfiem a kontrolních zvířat usmrcených 24 hodin po aplikaci poslední dávky. Imunoblotová detekce byla provedena s využitím specifických protilátek orientovaných proti AC I-IX. Byl...