Využití metod hmotnostní spektrometrie v identifikaci a lokalizaci významných molekul parazitických helmintů

Abstract

Tato práce shrnuje základní technologická řešení, postupy a principy hmotnostní spektrometrie a zaměřuje se na její využití v oblasti parazitologie. V první části jsou postupně definovány jednotlivé fáze zpracování biologického vzorku s využitím hmotnostní spektrometrie - od ionizace až po způsoby vyhodnocování výsledků. Různé postupy jsou prezentovány především na příkladech publikací zabývajících se využitím hmotnostní spektrometrie při identifikaci molekul parazitických helmintů, se zaměřením na proteiny a fasciolidní motolice (např. Fasciola hepatica). Druhá část práce se věnuje identifikaci a lokalizaci molekul pomocí zobrazovací hmotnostní spektrometrie a využití této techniky v experimentální biologii, parazitologii. V závěru práce je navržen aplikovatelný postup pro identifikaci a lokalizaci významných proteinů motolice Fascioloides magna s využitím kombinace techniky mikrodisekce a hmotnostní spektrometrie.

The thesis summarises the fundamental technological solutions, processes and principles of mass spectrometry with special focus on their use in parasitology. In the first part, the particular phases of processing of the biological sample by using mass spectrometry are defined - from ionisation to the evaluation of results. In the text, the various methodological approaches are presented mainly on the published examples concerning the identification of molecules from parasitic helminths, especially proteins of fasciolid flukes (e.g. Fasciola hepatica). The second part of the thesis comprises the methods of identification and localization of molecules by using mass spectrometry imaging and the use of this combined technique in experimental biology, parasitology, is discussed. There is also proposed the procedure including the combination of laser microdissection and mass spectrometry techniques which could be applied for identification and localisation of important proteins of the fluke Fascioloides magna.