Stanovení neesterifikovaných mastných kyselin v krevní plasmě

Abstract

Stanovení celkové koncentrace neesterifikovaných mastných kyselin (nonesterified fatty acids, NEFA) v plazmě patří mezi rutinní biochemické vyšetřovací metody. Pro detailnější metabolické studie je třeba i stanovení jejich profilu, tj. identifikace a kvantifikace jednotlivých složek. Stanovení profilu NEFA se běžně provádí kapilární plynovou chromatografií, není však ujednocen způsob jejich izolace od ostatních plazmatických lipidů. To lze provést buď extrakcí, nebo preparativní tenkovrstevnou chromatografií. Cílem předkládané práce bylo srovnat obě separační techniky. Vzorky směsné krevní plazmy od dobrovolných dárců byly analyzovány kapilární plynovou chromatografií po předchozí separaci tenkovrstevnou chromatografií a alternativně extrakcí kapalina-kapalina. Srovnání výsledků t-testem bylo provedeno jak pro absolutní koncentrace jednotlivých mastných kyselin, stanovené metodou vnitřního standardu (kyselina margarová), tak pro relativní zastoupení (Rel%). Reprodukovatelnost výsledků byla výrazně lepší u extrakční metody než u metody TLC - hodnoty relativní směrodatné odchylky jednotlivých skupin FA podle nenasycenosti byly 4,3- 11,3% vs. 8,6-33,8% pro relativní zastoupení (Rel%) a 16,5-25,5% vs. 15,4-47,4% pro absolutní koncentrace. U jednotlivých FA, které měly zastoupení větší než 0,1 Rel%,...

The determination of non-esterified fatty acids (NEFA) in plasma is possible by many routine biochemical methods. For more detailed metabolic studies it is required to analyse the fatty acid (FA) profile. The NEFA profile determination is usually performed by the capillary gas chromatography (GC), but the sample preparation is not uniform. NEFA may be isolated by the extraction process or by the preparative thin-layer chromatography (TLC). The aim of this study was to compare these two separation procedures. The samples of pooled plasma from volunteer donors were analyzed by capillary GC after previous separation procedure by the TLC and the liquid-liquid extraction. The results were compared by the t-test for both the absolute concentration of individual FA provided by the internal standard (margaric acid) method and the relative abundance (Rel%). The reproducibility of the results was significantly better for the liquid-liquid extraction method than the TLC. The relative standard deviations (RSD) of the FA groups (unsaturated, monosaturated and polysaturated) were from 4.3 to 11.3 % vs. 8.6 to 33.8 % for the relative abundance and from 16.5 to 25.5% vs. 15.4 to 47.4% for the absolute concentration. For each FA, which were represented by more than 0.1 Rel %, RSD ranged from 4.5 to 47.8% vs. 9.5 to...