Analýza polyfenolových látek ve vybraných pivovarských surovinách metodou HPLC-HRMS

Abstract

a klíčová slova Abstrakt: Tato práce byla zaměřena na separaci proanthokyanidinů (PAs) v pivu, v pivovarských surovinách (chmel, slad) a v pivovarských meziproduktech (sladina, mladina, mladé pivo) za použití vysokoúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s hmotnostním spektrometrem s vysokým rozlišením. K separaci proanthokyanidinů byla použita chromatografická kolona XSELECT HSS T3. Mobilní fáze byla tvořena směsí 0,1% kyseliny mravenčí ve vodě (A) a 0,1% kyseliny mravenčí v acetonitrilu (B a separace probíhala v gradientovém módu. Kalibrační rozsah pro katechin, prokyanidin B1 a B2 byl lineární v rozsahu od 10 µg.l-1 do 200 µg.l-1 u epikatechinu od 5 µg.l-1 do 200 µg.l-1 . Mez stanovitelnosti (LOQ) byla stanovena pro katechin, prokyanidin B1 a B2 na 10 µg.l-1 a pro epikatechin 5 µg.l-1 . Výtěžnost metody byla okolo 100 %. Metoda měla taktéž vyhovující opakovatelnost, kdy relativní směrodatná odchylka (RSD) byla u všech PAs menší než 20 %. Tato metoda byla využita pro sledování změn profilu zastoupení PAs během pivovarského procesu u katechinu, epikatechinu, prokyanidinu B1, B2 a B3. Bylo potvrzeno, že katechin, epikatechin, prokyanidin B1 a B2 přecházejí převážně z chmele a prokyanidin B3 je obsažen pouze v ječmenu. Dále byla metoda využita k ověření předpokladu, že profil proanthokyanidinů...

The thesis has focused on the separation of proanthocyanidins (Pas) in beer, raw beer material and beer intermediates (wort, hopped wort, green beer) by using high performance liquid chromatography coupled to high resolution mass spectrometric detection. A chromatographic column XSELECT HSS T3 was used for separation of individual proanthocyanidins. Mobile phase was formed by a mixture of 0,1% formic acid in water (A) and 0,1% formic acid in acetonitril (B), separation was conducted in gradient mode. Calibration range for catechin and procyanidin B1 a B2 was linear in the range from 10 µg.l-1 to 200 µg.l-1 and for epicatechin from 5 µg.l-1 to 200 µg.l-1 . Limit of quantitation (LOQ) was set to the lowest point of calibration curve, hence for catechin, procyanidin B1 and B2 was LOQ = 10 µg.l-1 and for epicatechin was LOQ = µg.l-1 . Yield of method of the observed Pas was very good, where yield oscillated around 100%. The method also had excellent repeatability, where the relative standard deviation (RSD) was lower then 20%. After optimization of this method it was used for observation of profile changes during brewery process in catechin, epicatechin, procyanidin B1, B2 and B3. It was discovered, that catechin, epicatechin, procyanidin B1 and B2 originate mainly from hops and procyaniding B3 is...