Průtoková injekční analýza vybraných glykosaminoglykanů se spektrofluorimetrickou detekcí

Abstract

Diplomová práce se zabývá stanovením heparinu a chondroitin sulfátu technikou průtokové injekční analýzy se spektrofluorimetrickou detekcí. Stanovení je založeno na interakci negativně nabitého heparinu respektive chondroitin sulfátu s kationtovým barvivem (azur A nebo fenosafranin), která se projevuje poklesem intenzity fluorescence barviva v jeho emisním maximu. Byly nalezeny optimální podmínky stanovení ve statickém uspořádání a změřeny kalibrační závislosti. Byly optimalizovány podmínky FIA stanovení a zjištěny parametry: objem dávkovaného vzorku 100 μl, délka reakční cívky 60 cm, průtoková rychlost 0,7 ml min-1 , koncentrace azuru B 1,6×10-5 mol dm-3 , koncentrace fenosafraninu 3,5×10-5 mol dm-3 . Pro stanovení heparinu pomocí azuru B byl zjištěn LOD = 0,023 IU ml-1 a LOQ = 0,186 IU ml-1 s lineárním dynamickým rozsahem 0,19-1,43 IU ml-1 . Pro stanovení heparinu pomocí fenosafraninu byl zjištěn LOD = 0,102 IU ml-1 a LOQ = 0,192 IU ml-1 s lineárním dynamickým rozsahem 0,19-1,79 IU ml-1 . Pro stanovení chondroitin sulfátu pomocí azuru B byl zjištěn LOD = 0,58 mg dm-3 a LOQ = 2,37 mg dm-3 s lineárním dynamickým rozsahem 2,37-8,32 mg dm-3 . Vyvinutá stanovení byla aplikována na stanovení heparinu, resp. chondroitin sulfátu, v léčivých přípravcích. Klíčová slova Azur B Fenosafranin...

The thesis is focused on a determination of heparin and chondroitin sulfate, using flow injection analysis with spectrofluorimetric detection. The determination is based on the interaction of negatively charged heparin, chondroitin sulfate resp., with a cationic dye (azure B or phenosafranine) which is manifested by the decrease in fluorescence intensity of the dye in its emission maximum. The optimal conditions for the determination in static mode were found, and calibration dependencies were measured. The conditions of FIA were optimized and following parameters were established: the volume of dispensed sample of 100 ml, the length of the reaction coil 60 cm, the flow rate 0.7 ml min-1 , the concentration of azure B 1.6×10-5 mol dm-3 , the concentration of phenosafranine 3.5×10-5 mol dm-3 . For the determination of heparin using azure B it was found: LOD = 0.023 IU ml-1 , LOQ = 0.186 IU ml-1 , and linear dynamic range 0.19-1.43 IU ml-1 . For the determination of heparin using phenosafranine it was found: LOD = 0.102 IU ml-1 , LOQ = 0.192 IU ml-1 , and linear dynamic range 0.19-1.79 IU ml-1 . For the determination of chondroitin sulfate using azure B it was found: LOD = 0.58 mg dm-3 , LOQ = 2.37 mg dm-3 , and linear dynamic range 2.37-8.32 mg dm-3 . The developed determination was applied to the...