Serinová proteasa SmSP2 z krevničky Schistosoma mansoni

Abstract

Krevnička Schistosoma mansoni patří k nejvýznamnějším lidským parazitům. Proteolytický systém schistosomy je klíčový pro její interakci s hostitelem, proto se v poslední době staly některé proteasy potenciálním cílem terapeutického zásahu. Tato práce se zabývá dosud nepopsanou serinovou proteasou SmSP2, jejíž biologická funkce je dosud neznámá. Tato proteasa je též zajímavá extrémně vysokým expresním profilem u vývojových stádii parazitujících člověka. V rámci této diplomové práce byla rekombinantní SmSP2 exprimována v prokaryotickém i eukaryotickém expresním systému (E. coli a P. pastoris) a purifikována pomocí chromatografických metod. Byly připraveny polyklonální protilátky proti SmSP2. Byly optimalizovány podmínky pro refolding SmSP2 a byla provedena základní biochemická charakterizace. Substrátová preference pro jednotlivé aminokyseliny v P1 - P4 pozicích byla určena pomocí kombinatoriální knihovny syntetických fluorogenních peptidů (PS-SCL).

Blood fluke Schistosoma mansoni is one of the most important human parasites. Proteolytic system of schistosoma is crucial for parasite - host interactions. Therefore some of the proteases became potential therapeutic targets. This work is focused on not yet characterized serine protease SmSP2. SmSP2 is newly discovered protease of S. mansoni, whose biological role is unknown. This protease is highly expressed in developmental stages parasitizing humans. SmSP2 was recombinantly expressed in prokaryotic and eukaryotic expression system (E. coli a P. pastoris) and purified using chromatographic methods. Recombinant SmSP2 was used for polyclonal antibody production. Conditions for refolding were optimized. Basic biochemical properties of the protease were detected and substrate amino acid preferences for P1 - P4 sites for single aminoacids were identified using synthetic fluorogenic peptides for positional scanning substrate combinatorial library (PS-SCL). (In Czech)