Analýza mutantů Rpg1/eIF3a v Saccharomyces cerevisiae.

Abstract

Rpg1/Tif32/eIF3a je esenciální a největší podjednotkou translačního iniciačního faktoru eIF3 kvasinky Saccharomyces cerevisiae. Vedle jejích interakcí v rámci eIF3 komplexu byla již dříve popsána též její vlastnost interagovat s mikrotubuly. Předběžné výsledky laboratoře s kmeny v genetickém pozadí W303 ukázaly na existenci syntetického fenotypu rpg1-2 mutanty s mikrotubulárním inhibitorem nokodazolem. Cílem této práce byla analýza "mikrotubulárního fenotypu" rpg1-2 mutanty a objasnění možného vlivu odlišného genetického pozadí. Prokázala jsem, že nezávisle na genetickém pozadí kmene (W303, BY, SEY) byly všechny analyzované mutanty rpg1-1, rpg1-2 a rpg1-3 termosenzitivní. Zjistila jsem však, že tyto mutanty v BY a SEY genetickém pozadí za nepermisivních podmínek (37řC, 4 h) nevykazují terminální fenotyp a nezastaví buněčný cyklus v G1 fázi, tak jak bylo popsáno dříve u kmenů pozadí W303. Tyto mutantní kmeny také nevykazovaly zvýšenou citlivost k benomylu a žádná z testovaných mutací v těchto kmenech neovlivňuje obnovu mikrotubulárního systému po uvolnění z působení nokodazolu. Připravila jsem nové kmeny s kombinací delece genu BUB1 s jednotlivými testovanými termosenzitivními mutacemi v genu RPG1. Podrobná fenotypová analýza těchto dvojitých mutantů ukázala, že disfunkce obou genových produktů vede...

Rpg1/Tif32/eIF3a is an essential and the largest subunit of translation initiation factor eIF3 in yeast Saccharomyces cerevisiae. Besides interactions within the eIF3 complex it has been shown to interact with microtubules. Preliminary data of the laboratory obtained using strains of the W303 genetic background indicated that there is a synthetic phenotype between rpg1-2 mutant and microtubule inhibitor nocodazole. Aim of this work to elucidate this "microtubule phenotype" of the rpg1-2 mutant and its dependency on used genetic background. I confirmed that independently on genetic background (W303, BY, SEY) all mutants rpg1-1, rpg1-2 and rpg1-3 were temperature- sensitive. I found that in contrast to published data on rpg1 mutants of the W303 background these mutants of the BY and the SEY backgrounds do not arrest the cell cycle in G1 phase during cultivation at the restrictive temperature (37řC, 4 hours). In addition, all three mutants did not show an increased sensitivity to benomyl and none of them affects microtubule rearrangement after a release of cells from the nocodazole treatment. I constructed new strains with a combination of the BUB1 gene deletion with the particular rpg1 mutation. Phenotypic analyses of new double mutants revealed that simultaneous dis-function of Bub1 and Rpg1 results...