Celulolytické huby a ich diverzita na rastlinnom opade

Abstract

Rozklad opadu si vyžaduje prítomnosť zodpovedajúcich degradačných enzýmov, ktorých dobrými producentmi sú práve huby. Lesné pôdy vykazujú značnú mieru heterogenity v rozložení týchto enzýmov v rôznych merítkach. Navyše produkcia degradačných enzýmov sa mení v priebehu roka. Obvykle ju sprevádza i zmena spoločenstva húb. V tejto práci som sa zaoberala rozložením enzymatickej aktivity na povrchu jednotlivých listov z opadu a zaujímal ma rozdiel v zložení spoločenstiev osídľujúcich miesta kde prebieha intenzívny rozklad celulózy a miestach s nízkou enzymatickou aktivitou. Ďalším cielom bolo izolovať celulolytické huby pomocou opadových sáčkov s celulózou, umiestnených v lesnom opade, s využitím metódy filtrovania spór a metódy vyrieďovania (dilution-to-extinction). V listnatom lese s dominantným porastom dubu bol odobraný opad v štyroch štádiách rozkladu: senescentné listy z vetvičiek a opad po 2, 10 a 22 mesiacoch dekompozície. Na desiatich listoch z každého druhu opadu bola zmeraná aktivita celobiohydrolázy na ich povrchu. Listy boli prichytené na doštičku s agarom a plocha listu bola pokrytá agarózou obsahujúcou fluorescenčne značenú substrát. Pre každý list bola vytvorená mapa relatívnej enzýmovej aktivity a v miesta s nízkou a vysokou aktivitou bol vyrezaný štvorec o ploche približne 1 cm2 . Z oboch...

Litter decomposition requires the presence of corresponding degradative enzymes, produced mainly by fungi. Forest soils show considerable spatial heterogeneity of distribution of these enzymes at diferent scales. Moreover, enzyme pruduction varies during the year, usually accompanied by the change in fungal community composition. In this work I examined if this spatial heterogeneity can be seen even at a scale of an individual leaf and whether the fungal community differs among enzyme activity hotspots and inactive parts of the leaves. Another goal was isolation of celulytic fungi from cellulose litterbags incubated on forest floor using particle filtration and dilution-to-extinction method. In a broadleaved forest dominated by oak leaves at different stages of decay were collected: senescent leaves on twigs, and leaves after 2, 10 and 22 months of decomposition. Ten leaves per season were taken for analysis of cellobiohydrolase activity over the leaf surface. Leaves were attachmed onto melted agarose plate and leaf surface was covered with low melting point agarose containing fluorescently labelled substrate. For each leaf a map of enzyme activity was created and area with the high and low enzyme activity was identified. From both sites a square of approx. 1 cm2 was cut out, DNA was extracted and fungal...