Poziční klonování genu Hst1 (Hybrid sterility 1) a molekulární analýza jeho kandidátních genů

Abstract

Summaryofpublications 1. Positionalcloningof the Hybridsterility1 gene:finegenetic mappingand evaluationof twocandidategenes Hybridsteri|iýis one of the mechanismsof speciation.The Hybridsteriliý1 (HsÍí)genewasthefirstmappedmammaliangene.The geneaffectsfertiliýof male hybridsbetweencertainlaboratorystrains(suchas C57Bl/10)and Mus musculus musculusmiceby causinga breakdownof spermatogenesisat thestageof primary spermatocytes.|ntheprocessof positiona|c|oningoftheHsÍígene,Wegenerateda contigof bacterialartificialchromosomes(BACs)and subsequentlya lowcoverage sequenceof the candidateregionof the '12951/SvlmJstrain.New geneticmarkers narroweddown the HsÍíregionfrom 580 to 360 ki|obases.The productsof two genesfromthisregion,TATA-bindingprotein(Ibp)and proteasomesubunitbeta1 (Psmb1\,accumulateduringspermatogenesis.The proteinshave been described previouslyas having conservedC{erminal sequencesand species-specificN- termini.We eva|uatedthe candidacyof thesegenesfor Hsťíby a||e|icsequencing and by real-timereverse-transcriptionPCR of testicularmRNAs.The resultssuggest thatneitherthePsmÓí northe lbp genecausehybridsteri|ity.Thesing|enuc|eotide po|ymorphisms(SNPs)we havefound,was usedfor the hap|oýpeana|ysisof the HsÍíregion.

Souhrnpub|ikací 1. PozičníklonovánígenuHsÍí(Hybridsterility1):jemné genetickémapovánía zhodnoceníkandidaturyvybraných kandidátníchgenů Gíle:Konstrukcefyziká|nímapyHsťíkandidátníob|astipomocíBAC k|onů. lso|ace nouýchgenetickýchmarkerů,pomocíkteých by by|o moŽnézúŽítHst1 kandidátníob|ast.Mým úkolemby|oověřeníkandidaturydvou vybranýchgenů z Hsťíob|asti'u kteýchby|azaznamenánazuýšenáexpreseve spermatogenezi. Metody: BAC (BacterialArtificialChromosome)klonypokýající HsÍíob|ast by|yisoloványz knihovnyBAC k|onůnatečkovanéna ny|ovovémembránypomocí hybridizaces radioaktivněznačenýmipróbami. Ke zmapováníiso|ovanýchBAC k|onůby|opouŽitoPCR amplifikujícícelkemosmznámých|okusůroz|oŽenýchpodé| ce|éHsťíob|asti.K|ony|emujícíHsťíob|astbylysubk|onoványa náhodněvybrané Úsekysekvenovány.Nově na|ezenémikrosatelitovémarkery,amp|ifikovanépomocí PCR a po|ymorfnímezi kmeny B10 a C3H' by|y pouŽityk mapováníHsfí na zvířatechze zpětnéhokříŽení.A||e|ickéC3H varianý genůlbp a Psmb1 by|y získány sekvenovánímPCR produktůamp|ifikovanýchz C3H cDNA knihovny. Kvantifikacetranskriptůobou genů byla provedena pomocí iso|ace RNA z patnáctidenníchferti|nícha steri|níchhybridů'jejím přepsánímdo cDNA a nás|ednýmPCR v reá|némčase. Výs|edky:V procesu pozičníhok|onovánígenu HsÍí by|a zkonstruována tyziká|nímapapomocíBAC k|onů'stabi|nějšícha...