Vliv sekvencí intronů na efektivitu sestřihu v Saccharomyces cerevisiae.

Abstract

Sestřih pre-mRNA je vysoce regulovaným buněčným procesem. Regulace tohoto procesu vyplývá ze současné souhry spliceosomu a dalších sestřihových faktorů, které dokážou interpretovat cis-elementy molekuly pre-mRNA. Krátké konzervované sestřihové sekvence intronu představují základní a nezbytné elementy pro vystřižení intronových sekvencí z primárního transkriptu, přesto ale nejsou dostatečnými prvky intronu pro efektivní proces sestřihu. Další vlastnosti molekuly pre-mRNA zasahují do složité regulace sestřihu. Ve své práci se zabývám vlivem sekvencí intronů z genů ACT1 a MAF1 na efektivitu sestřihu v buňkách s narušeným spliceosomem (prp45(1-169)). Výsledky ukazují regulační úlohu oblasti intronu genu ACT1 mezi místem větvení (BP) a 3' sestřihovým místem (3'ss), která udržuje efektivní sestřih v mutantních buňkách. Konkrétní element intronu genu ACT1 v oblasti BP-3'ss však nebyl identifikován. Ve své práci dále ukazuji, že alternativní BP sekvence nacházející se v intronu genu ACT1, která je lokalizována mimo oblast BP-3'ss, je dalším elementem, který moduluje efektivitu sestřihu u kvasinky Saccharomyces cerevisiae. Práce se dále věnuje sestřihovým faktorům, které by mohly figurovat v mechanismu výběru 3'ss. Na umisťování 3'ss do aktivního centra spliceosomu se významně uplatňuje heterodimer proteinů...

Pre-mRNA splicing is a highly regulated cellular process. The tight cooperation of spliceosome and other splicing factors that enable pre-mRNA cis-elements interpretation results in precise pre-mRNA splicing regulation. Short conserved splicing sequences within introns represent an elementary and indispensable element for intron removal from primary transcript, yet they are not sufficient signals for efficient splicing events. Additional pre-mRNA features affect complex splicing regulation. We took advantage of strains with slightly disrupted spliceosome (prp45(1-169)) to study the effect of ACT1 and MAF1 intronic sequences on splicing efficiency. Here we show, that ACT1 intron region between branch point (BP) and 3' splice site (3'ss) maintains splicing efficiency in mutant cells. However, the specific element within this region was not determined. In addition, results implicate an alternative BP in splicing efficiency modulation in yeast Saccharomyces cerevisiae. Interestingly, this alternative BP is localized in ACT1 intron outside of the BP-3'ss region. Furthermore, splicing factors with potential influence on 3'ss selection were studied. Heterodimer composed of Slu7p and Prp18p participates in 3'ss positioning to the active site of the spliceosome. Splicing analysis of substrates with two...