Využití kapilární elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí pro analýzu proteinů

Abstract

Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Bc. Kateřina Vatrasová Školitel: doc. RNDr. Miroslav Polášek, CSc. Konzultant: PharmDr. Klára Petrů, Ph.D. Název diplomové práce: Využití kapilární elektroforézy s bezkontaktní vodivostní detekcí pro analýzu proteinů V současnosti existují různé způsoby stanovení bílkovin. Cílem této práce bylo vyvinout, optimalizovat a charakterizovat metodu kapilární elektroforézy s vodivostní detekcí pro analýzu modelové směsi proteinů (α-laktalbumin, β-laktoglobulin, karboanhydráza, lysozym a ribonukleáza) a porovnat s konvenční UV detekcí. Mezi zkoumané podmínky patřily vliv pokrytí vnitřní stěny kapiláry na adsorpci proteinů, dále složení a koncentrace vhodného separačního elektrolytu, vliv napětí a teploty. K analýze byla využita křemenná kapilára o délce 50 cm (efektivní délka pro vodivostní detektor 35cm, pro UV detektor 41,5 cm) a vnitřním průměru 50 μm. V případě UV detekce byla vybrána vlnová délka 210 nm. Vhodným způsobem úpravy kapiláry bylo statické pokrytí vnitřní stěny několikanásobnou vrstvou iontových polymerů (polybren-dextran sulfát- polybren). Rozdělení směsi pěti proteinů bylo dosaženo v základním elektrolytu 1,5M kyselině octové (pH 2). Separace probíhala při napětí -25 kV a teplotě 25 řC....

Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical Chemistry Candidate: Bc. Kateřina Vatrasová Supervisor: doc. RNDr. Miroslav Polášek, CSc. Consultant: PharmDr. Klára Petrů, Ph.D. Title of Diploma Thesis: Use of capillary electrophoresis with contactless conductivity detection for the analysis of proteins Nowadays there exist many methods for the determination of proteins. The aim of this work was to develop, optimize and characterize method for the analysis of a model mixture of proteins (α-lactalbumin, β-lactoglobulin, carboanhydrase, lysozyme and ribonuclease) by capillary electrophoresis with conductivity detection and to compare it with conventional capillary electrophoresis with UV detection. The influence of the capillary inner wall coating on the adsorption of proteins, the composition and concentration of convenient background electrolyte, and the voltage and temperature were examined as experimental conditions possibly affecting the separation. A 50-cm fused-silica capillary (effective length 35 cm for conductivity detector and 41.5 cm for UV detector) with internal diameter 50 μm was used for the analysis. The UV detection wavelength was 210 nm. The static coating of the inner capillary wall realized by successive multiple soaking with...