Vliv stresu na expresi některých neuropeptidů a jejich receptorů v srdci a CNS, za využití biochemických a imunofluorescenčních postupů

Abstract

SOUHRN Úvod a cíl: Studium neuropeptidů se stalo centrem zájmu pro rozsáhlé periferní a centrální regulační/modulační účinky, a pro možné terapeutické využití. Naše laboratoř se zabývá studiem oxytocinu (OT) a jeho analogů za fyziologického stavu a po působení stresu, od změn na molekulární a buněčné úrovni, až po změny chování. Cílem této práce bylo studium centrální regulační úlohy OT a jeho analogů, spolu s nově objevenými neuropeptidy galaninem (Gal) a galanin like peptidem (GalLP) v hypofýze. OT byl nově zařazen mezi kardiovaskulární hormony a dalším cílem bylo také studium OT, Gal, GalLP a jejich receptorů v srdci za fyziologických podmínek a po stresu. Centrální účinky těchto peptidů jsme testovali behaviorálními studiemi. Cílem byla rovněž syntéza OT, Gal a jejich analogů a chimérní molekuly OT s fluorescenčním markerem. Metody: Vypracovali jsme nové metody fluorescenčního stanovení exprese neuropeptidů a jejich receptorů, metodu Western blot a metodu kvantitativního RT qPCR k určení exprese mRNA sledovaných genů. Pro určení centrálních účinků galaninu jsme aplikovali behaviorální testy. Byl použit animální model akutního stresu pravidelně používaný naším pracovištěm. V naší laboratoři syntetizované peptidy a chiméra oxytocinu s fluorescenčním markerem umožnily experimenty, které by byly jinak...

Introduction and aim: Investigation of neuropeptides became in the center of research activities due to extensive peripheral and central modulatory effects of these peptides and due to their possible therapeutic use. Our laboratory is involved in the study of oxytocin (OT) and its analogs under physiological state and under stress, our studies ranged from the molecular- biological to behavioral studies. The aim of this work was the study of central regulatory role of OT and its analogs together with newly discovered neuropeptides galanin and galanin like peptide in the hypophysis. Recently, OT was included into the cardiovascular hormones. The aim of this work was also the study of OT, Gal, GalLP and their receptors in the heart under physiological state and under stress. Central effects of neuropeptides we tested in the behavioral studies. Another aim was synthesis of Gal, GalLP and its analogs and chimeric molecule of oxytocin with flurescent marker. Methods: We elaborated methods for immunofluorescent estimation of expression of neuropep- tides and their receptors, Western blot procedure and method of RT qPCR for the expression of mRNA of estimated genes. We used behavioral tests to detect central effects of peptides. We used acute stress developed in our lab. Peptides and chimera with...