Katabolická dráha hemu u chronické hepatitidy C

Abstract

Předkládaná práce se zabývá významem katabolické dráhy hemu u chronické hepatitidy C. Je zaměřena na objasnění možné asociace exprese/aktivity klíčových enzymů katabolické dráhy hemu, hemoxygenázy (HMOX) a biliverdinreduktázy (BLVRA) v jaterní tkáni a krvi (studie A) a polymorfismů HMOX1 a UDP-glukuronosyltransferázy (UGT1A1) (studie B) s rozdílnými histologickými nálezy a rozdílnou účinností protivirové terapie. Cílem práce bylo nalézt faktory, které by u pacientů s chronickou HCV infekcí mohly predikovat progresi jaterního poškožení a efekt protivirové terapie před jejím zahájením. Pro účely této studie jsme zavedli vysoce citlivou metodiku na stanovení aktivity HMOX v mononukleárech periferní krve (PBMC), která dosud nebyla k dispozici. Zavedli jsme a zvalidovali RealTime PCR metodiku na stanovení exprese HMOX a BLVRA v jaterní tkáni a v periferních leukocytech (PBL). (GT)n a (TA)n varianty promotoru genu pro HMOX1 a UGT1A1 jsme stanovili simultánní fragmentační analýzou, jejíž metodika byla v naší laboratoři nedávno vyvinuta a rovněž publikována. Pomocí uvedených metod jsme neprokázali asociaci exprese/aktivity enzymů katabolické dráhy hemu a polymorfismů HMOX1 a UGT1A1 s histologickou aktivitou v jaterní tkáni. Prokázali jsme však významné rozdíly v expresi BLVRA v PBL mezi pacienty se...

This thesis focuses on the importance of the heme catabolic pathway in chronic hepatitis C (HCV). The aim is mainly to investigate, whether expresion/activity of key enzymes of the heme catabolic pathway, heme oxygenase (HMOX) and biliverdin reductase (BLVRA) in the liver and blood (study A) or promoter variations of HMOX1 and UDP- glucuronosyltransferase (UGT1A1) (study B) may be associated with the progression of fibrosis and may also predict antiviral treatment outcome in patients chronically infected with HCV. We set up a new sensitive method to quantify HMOX activity by reduction gas chromatography. We developed and extensively validated RealTime PCR assay for HMOX and BLVRA expression in the liver and peripheral blood leucocytes (PBL). The (GT)n and (TA)n dinucleotide variations in HMOX1 and UGT1A1 gene promoters, respectively, were determined by fragment analysis. No association was detected between either expression of HMOX/BLVRA or the HMOX1/ UGT1A1 promoter variants and the individual histological stages of liver disease in the HCV positive patients. A marked difference in BLVRA expression in PBL between the sustained responders (SVR) and patients with treatment failure (NVR) was detected before antiviral treatment and during the follow-up. Our data suggests, that BLVRA basal expression...