Vývoj analytických metod pro stanovení fosforylovaných složek bakteriálních buněčných membrán

Abstract

Fosfolipidy jsou dominantními komponentami bakteriálních buněčných membrán, v nichž tvoří fosfolipidové dvojvrstvy. Bakterie se liší svým fosfolipidovým složením, což umožňuje stanovení a identifikaci významných skupin mikroorganismů. Lze však sledovat i změnu fosfolipidového zastoupení u bakterií stejného druhu, protože složení je ovlivněno celou řadou environmentálních podmínek. K identifikaci a stanovení bakteriálních fosfolipidů se běžně využívá tenkovrstvá chromatografie zejména pro svou minimální instrumentaci. Nevýhodou této metody je časová náročnost a požadavky na pečlivost a zručnost pracovníka. Rostoucí zájmem o fosfolipidové dvojvrstvy napomáhá k podrobnějšímu prozkoumání složení mastných kyselin, neboť detailnější analýzy umožňují zjistit o mikroorganismech ještě více. Pro tyto účely se zdá být tou nejlepší volbou plynová chromatografie spojená s hmotnostní spektrometrií. Metoda slouží jak k identifikaci, tak k určení celkového zastoupení mastných kyselin v molekule fosfolipidu. Dále je využívána k určení polohy a počtu izomerií dvojných vazeb a funkčních skupin na uhlovodíkovém řetězci. Zatímco pro identifikaci a stanovení nepolárních částí fosfolipidů již existuje vhodná a osvědčená analytická ...

Phospholipids are dominant components of bacterial cell membranes, where they create double layers. Bacteria differ in their phospholipid composition determination of which can help in identification of important groups of microorganisms. Phospholipid composition of bacteria is influenced by many environmental factors, therefore its variation can be observed within one bacterial stem also. Because of its simplicity, thin layer chromatography is usually applied to identification and determination of bacterial phospholipids. Disadvantage of this method are the high demands of time, carefulness and skills of the analytical personnel. The increasing interest in the phospholipid double-layer promotes the detailed investigation of their fatty acid composition because the more detailed analyses allows for more information yield about bacteria. Gas chromatography hyphenated with mass spectrometry seems to be the best choice for these purposes. Fatty acid identity and total fatty acid content in phospholipid molecules could be determined by this method. Additionally, number, position and isomerism of double bonds and presence of other functional groups on hydrocarbon chain could be determined. Whereas a suitable and...