Separace peptidů na nové stacionární fázi na bázi cyklofruktanu, charakterizace separačního systému

Abstract

Hydrofilní interakční kapalinová chromatografie se používá k separaci polárních látek jako alternativa k reverznímu módu HPLC, ve kterém jsou tyto látky obtížně separovatelné nebo mají velmi nízké retence. V současné době existuje mnoho komerčně dostupných stacionárních fází a další se stále vyvíjí. V této práci byly porovnávány separační a interakční vlastnosti chromatografických systémů se silikagelovou stacionární fází a se stacionární fází na bázi isopropylovaného cyklofruktanu za podmínek hydrofilní interakční kapalinové chromatografie. Byly optimalizovány metody pro separace směsí čtyř pentapeptidů a pěti nonapeptidů na těchto dvou stacionárních fázích. Následně byly studovány interakce, které se významně uplatňují v optimalizovaných separačních systémech modelem lineárních vztahů volných energií. Interakce významně ovlivňující retenci analytů na obou stacionárních fázích jsou interakce prostřednictvím vodíkové vazby a na stacionární fázi na bázi isopropylovaného cyklofruktanu také disperzní a elektrostatické interakce. Klíčová slova: peptidy, cyklofruktan, LFER, HILIC

Hydrophilic interaction liquid chromatography is in the present time very often used for separation of polar compounds which are complicated separated in reverse phase HPLC or they are not sufficiently retained. Various stationary phases suitable for HILIC are commercially available and new stationary phases are still developing. In this work bare silica and isopropyl cyclofructan modified silica stationary phases were compared. Chromatographic behavior of sets of four pentapeptides and five nonapeptides was tested in detail under hydrophilic interaction liquid chromatography. Additionally, mobile phase composition changes the types of interaction and their strengths were studied using linear free energy relationship method. Obtained results denoted that the main role in the retention mechanism on the isopropyl cyclofructan stationary phases play hydrogen bond acidity and dipolarity/polarizibility, while dispersion interactions are preferred in the mobile phase. On the other hand, bare silica stationary phase provides only one interaction type - hydrogen bond acidity. Key words: peptides, cyclofructan, LFER, HILIC