Zavedení nových postupů přípravy a uchování tkání pro transplantace v očním lékařství

Abstract

Úvod: Prudký rozvoj metod zadní lamelární keratoplastiky vyvolal potřebu přípravy zadních rohovkových lamel v České republice. Prvním cílem této dizertační práce se stalo zavedení a standardizace nové metody manuální preparace rohovkových lamel pro Descemet Membrane Endothelial Keratoplasty with a Stromal rim (DMEK-S) v oční tkáňové bance. Po stanovení kritérií posuzujících kvalitu endotelu rohovkové lamely jsme získali povolení k dodávání tkání pro transplantační účely a po dvou letech přípravy jsme zhodnotili dosažené výsledky. Dalším krokem bylo ověřit šetrnost nové techniky inzerce rohovkových lamel pomocí cartridge. Pro výzkum možností dlouhodobého uchování zadních rohovkových lamel metodou vitrifikace v kapalném ethanu jsme zvolili za modelovou tkáň amniovou membránu. Materiál a metody: K přípravě lamel obsahujících v centrální zóně pouze endotel na Descemetově membráně a v periferii navíc vrstvu zadního stromatu byly použity korneosklerální terče uchované metodou tkáňových kultur. Manuální preparace probíhala na arteficiální přední komoře za pomoci techniky big bubble. Kvalita endotelu byla hodnocena před uchováním rohovky, před přípravou lamely, ihned po přípravě a po 2 dnech skladování při teplotě 31řC. Pro stanovení kritérií kvality tkání byla hodnocena skupina 12 rohovek s hustotou...

Introduction: Recent advances in posterior lamellar keratoplasty necessitated the preparation of posterior corneal lamellae even in the Czech Republic. The aim of this work was to introduce and standardize a novel method of manual preparation of corneal lamellae for Descemet Membrane Endothelial Keratoplasty with a Stromal rim (DMEK-S) in an ocular tissue bank. After setting the criteria for endothelial quality, we obtained a licence to provide the tissues for transplantation purposes. The obtained results were analysed after two years. Furthermore, a novel lamellar insertion technique using a cartridge was assessed. The potentials for the long-term storage of posterior corneal lamellae by the vitrification in liquid ethane was studied using human amniotic membrane as a model tissue. Material and Methods: Corneoscleral buttons stored in tissue cultures were used to prepare lamellae consisting of a central zone of endothelium and Descemet membrane supported by a stromal rim at the periphery. The manual preparation was performed on an artificial anterior chamber using the big bubble technique. Endothelial quality was assessed before storage, before and immediately after preparation as well as after 2 days of storage at 31řC. A group of 12 corneas with a live endothelial cell density ≥ 2500 cells/mm2...