Chemiluminiscenční stanovení vitamínu B12 pomocí průtokových technik analýzy

Abstract

Tato diplomová práce se zabývá stanovením vitaminu B12 pomocí průtokových technik analýzy. Stanovení je založeno na reakci luminol-peroxid vodíku. Kobaltnatý iont (Co2+ ), přítomný ve struktuře vitaminu B12, v reakci vystupuje jako katalyzátor. V experimentální části byly vypracovány metody stanovení iontu Co2+ technikami průtokové analýzy, a to průtokovou injekční analýzou (FIA) a sekvenční injekční analýzou (SIA). Následně bylo přistoupeno k samotným rozkladům vitaminu B12 vedoucí k uvolnění iontu Co2+ z jeho molekuly. K tomu je možné využít různých typů rozkladů, které jsou zmíněny v této práci. Nejvyšší účinnosti bylo dosaženo rozkladem vitaminu B12 s K2S2O8 o koncentraci 1,5 mmol.l-1 a dobou ozařování 1 minuta. Účinnost rozkladu dosáhla hodnoty 74,43 %. Při FIA uspořádání byl zjištěn lineární rozsah do 500 mg.l-1 , relativní směrodatná odchylka (RSD) 2,59% (n = 10) a limit detekce (LOD) 55 µg.l-1 . Optimální objem vzorku potřebného k analýze byl 60 µl. Doba jedné analýzy činila 140 s. Získané výsledky ze SIA uspořádání byly následující: lineární dynamický rozsah do 50 mg.l-1 , RSD = 4,5% (n= 10) a LOD = 25 µg.l-1 . Optimální objem vzorku potřebného k analýze byl 250 µl. Doba jedné analýzy činila 80,1 s. Interferenční studie ukázala, že z celé řady iontů ovlivňující stanovení byly vybrány pouze...

This thesis reports determination of vitamin B12 by flow techniques of analysis. This method is based on luminol-peroxide chemiluminiscence assay for the detection of cobalt (II) ions in vitamin B12 molecules. The method includes releasing of Co2+ from the vitamin B12 using different types of its decomposition; these are mentioned in this thesis. The efficiency of the decomposition of real samples of vitamin B12 in this study reached 74.43 %. The high efficiency was achieved with 1.5 mmol.l-1 K2S2O8 and irradiation time 1 minute. In the FIA mode, the linear range obtained was between 1.0 to 500 mg.l-1 with a relative standard deviation (RSD) 2.59% (n = 10), limit of detection (LOD) 55 µg.l-1 . The minimum sample volume required and the time of analysis were 60 µl and 140.2 s. In the SIA mode, the linear range obtained was between 0.01 to 50 mg.l-1 with an RSD = 4.5% (n = 10), LOD = 25 µg.l-1 . The minimum sample volume required and the time of analysis were 250 µl and 80.1 s. Interference study showed that from wide range of interfering ions were selected only Ni2+ , Zn2+ and NO2 - , that from concentration level 50 mg.l-1 they significantly affect the determination of the Co2+ in solution. The intensity of chemiluminiscence most suppress ion Zn2+ . The solution with the concentration ratio of Co2+...