Identifikace trichologického materiálu metodou High Resolution Melting vybranými SNPs ve forenzní praxi

Abstract

The analysis of mitochondrial DNA (mtDNA) from shed hairs has gained high importance in forensic casework since telogen hairs are one of the common type of evidence left at the crime scene. This type of evidence very often lack of nuclear DNA (nDNA), so the identification based on the STR analysis is not possible. The analysis of trichological material lacking nDNA is not a commonly used method of the forensic praxis because of the high price of the regularly used mtDNA analysis method, as well as the time demandingness. Based on this, the main goal of this work is to establish a relatively fast, easy and cheap method able to analyze trichological material lacking of nDNA. For these reasons we decided to analyze the mtDNA and identify the trichological material by analysis of chosen SNP's followed by High Resolution Melting. We have analyzed 12 series of different biological materials that belongs to one person (e.g. buccal cells, trichological material in anagen - head, axillary and pubic hair shafts) in order to confirm the identity of mtDNA isolated from different type of biological materials. We have analyzed several set's of buccal cells and head hair shafts in telogen from 17 specimens. From total number of 5 selected SNP's, this essay was able to optimize analysis of 3 SNP's. Due to the...

Analýza mitochondriální DNA (mtDNA) vlasů v telofázi hraje důležitou úlohu ve forenzním vyšetřování především z důvodu, že vlasy v telofázi jsou běžným typem biologických stop zanechaných na místě činu. Tento typ stop se vyznačuje častou absencí jaderné DNA, a tak není možné aplikovat standardní identifikační metody pomocí analýzy STR repetic. Vzhledem k časové a finanční náročnosti analýzy mtDNA není možné tuto analýzu provádět standardním postupem, který není využitelný ani jako screeningová metoda. Z tohoto důvodu jsme se rozhodli analyzovat mtDNA separovanou z trichologického materiálu a identifikovat jej na základě analýzy vybraných SNPs metodou High Resolution Melting (HRM). Abychom potvrdili shodnost mtDNA u různého typu biologického materiálu jednotlivce (bukální stěr, trichologický materiál v anafázi - vlasy, axilární ochlupení, pubické ochlupení), byly analyzovány takovéto sady od 12ti osob. Dále se analyzovala série bukálních stěrů a vlasů v telofázi od 17ti jedinců. Z celkového množství pěti vybraných SNP se podařila optimalizace analýzy tří SNP lokalizovaných na mtDNA. U pozic G3010A, C14766T je možná analýza trichologického materiálu v anafázi a telofázi. Možnost analýzy SNP C7028T je potvrzena pouze u trichologického materiálu v anafázi. Analýzou vybraných SNP pomocí námi...