Stanovení organických kyselin v pivu metodou HPLC

Abstract

Kukleva Ekaterina Abstrakt Cílem této bakalářské práce je vyvinout a optimalizovat metodu stanovení organických kyselin v pivu metodou HPLC s RI a nebo UV detekcí a ověřit ji na reálných vzorcích. Pivo je složitý matriční vzorek, který vyžaduje před analýzou úpravu, a to pomocí extrakce na pevné fázi (SPE). Pro extrakci byly zvoleny a porovnávány dvě SPE kolonky: Algient Bond-Elute SAX (SAX) a Supelco ENVI-Carb (CB). Sorbenty obou kolon se liší v hlavním principu extrakce, zatímco na SAX kolonce budou zadržovány anionty kyselin a interferující nepolární látky projdou kolonou bez zádrže, na kolonce CB by měl separační mechanismus probíhat přesně obráceně, interferující látky budou zadržovány a anionty analyzovaných kyselin projdou sorbentem bez zádrže. Výtěžnost extrakce organických kyselin z piva byla pro SAX kolonu 80 - 110% a pro CB kolonu 20-50 %. Stanovení šesti organických kyselin, jmenovitě citronové, jablečné, jantarové, mléčné, octové a šťavelové, se po extrakci s provádělo metodou HPLC na chromatografické koloně Eurokat H (Knauer) 0,01 N kyselinou sírovou jako mobilní fáze. Čas analýzy byl 25 minut. Byly použity a porovnány dva detekční systémy: refraktometrická (RI) a ultrafialová (UV) detekce. Rozlišení separovaných píků se pohybovalo v rozmezí 1,1 - 1,8 pro RI detektor a 1,1 - 1,6 pro UV detektor.

Kukleva Ekaterina Abstract Optimization and validation of HPLC method with RI or UV detection system for determination of six major organic acids in beer was made. Beer is very complicated matrix, therefore, the samples needs pretreatment using SPE. For solid phase extraction Algient Bond-Elute SAX (SAX) and Supelco ENVI-Carb (CB) cartridges were used and compared. Differences between those two cartridges is in their principle of pretreatment. While on SAX cartridge dissociated organic acid ions will be retained and interfere substances not, on CB cartridge interfering carbohydrates will be retained instead of organic acid ions, which will get through sorbent. Recoveries for organic acids on SAX and CB cartridges were80 - 110 % and 20 - 50 %, respectively. For determination of six organic acids, by name citric, malic, succinic, lactic, acetic and oxalic, Eurokat H (Knauer) HPLC column was used with 0.01 N sulfuric acid as a mobile phase. Time of analysis was 25 minutes per sample. Organic acid ions were detected using Refractive Index (RI) and Ulraviolet (UV) detectors. Peak resolution was 1,2 - 1,8 and 1,1 - 1,6 for RI and UV detection, respectively.