Mikroskopické měření vnitrobuněčného pH pomocí fluorescenčních sond

Abstract

Autor: Radka Muzikova Nazev prace: Mikroskopicke mereni vnitrobunecneho pH pomoci fluorescencni'ch sond Abstrakt: Tato prace se zabyva mikroskopickym mefenim vnitrobunecneho pH kvasinek Saccharomyces cerevisiae pomoci fluorescencnich sond. Jako pfedmet studia byly zvoleny kmeny IL 125 - 2B a komercne dostupne pekafske drozdi (PD). Mefeni bylo provadeno pomoci pH citlive fluorescencni sondy pyraninu, obarvenf bunek bylo provedeno pomoci ..pulzni elektroporace. Puvodnim prinosem praceje optimalizace podminek elektroporace pro pba pouzivane kmeny, dale byl zkouman vliv efektu vybelovani na vysledky mefeni. Byla .otestpvana metoda mikroskopicke kalibrace sondy pfimo uvnitf bunek pomoci nastaveni ..vnitrniho pH pomoci elektroporace na bunkach energizovanych i vyhladovelych. Pro kmen PD ^.bylo 'provedeno nekolik serii mefeni vnitrobunecneho pH. Zjistili jsme., ze pH cytozolu bunek napestovanych vtekutem YEPG rnediu je 6,8 aje velmi homogenni. Tato hodnota je shodna pro bunky dospele i pucici. V bunkach energizovanych byl pyranin transportovan do vakuol. Zmerene pH vakuol bunek kmene PB se lisilo u jednotlivych bunek ajeho hodnota se pohybovala v rozmezi 5,0-6,1 pH jednotky.