Vliv prostředí na stabilitu a strukturu vaječného lysozymu

Abstract

Tato diplomová práce se zabývá studiem stability a strukturních změn lysozymu. K tomuto studiu byla použita metoda derivační a diferenční spektrofotometrie v UV oblasti. Byl studován vliv tří alkoholů: ethanolu, propan-1-olu a 2-methoxyethanolu, a dále vliv teploty. V souladu s údaji v literatuře je lysozym v poměrně širokém rozsahu pH (3 - 10) poměrně stabilní a zachovává si víceméně nativní strukturu až do koncentrace alkoholu 40 % (ethanol, propanol) respektive 9 % ( 2-methoxyethanol). V tomto rozsahu pH je lysozym stabilní až do teplot kolem 55 řC. V kyselém pH (1,9) a v alkalickém prostředí (pH 11) je stabilita proteinu poněkud snížena a ke konformačnímu přechodu dochází již mezi 45 a 55 řC. Klíčová slova: derivační spektrofotometrie, diferenční spektrofotometrie, nevodná rozpouštědla, stabilita lysozymu

In this Thesis, we studied the stablity of lysozyme solutions with temperature and the influence of alcohols (ethanol, propan-1-ol, 2-methoxyethanol) on lysozyme structure. Within the limits of pH 3 to 10, the protein is rather stable and is not much influenced by concentrations up to 40 % of alcohol (for ethanol and propanol), or 9% of 2-methoxyethanol. Lowering or increase of pH (to 1.9 or 11, respectively) destabilizes the protein to some extent; this effect is more pronounced for the longer alkyl chain of propanol. The temperature stability of lysozyme up to 55 řC observed for solutions with pH 3 and 7 is in accordance with the data in literature, as well as the observation of some thermal denaturation starting between 45 an 50 řC in acidic solution (pH 1.9). Also at alkaline pH, the stability is lowered, and the protein is partially precipitated. Key words: derivative spectroscopy, differece spectroscopy, influence of alcohols, stability of lysozyme