Využití laserové mikrodisekce ke genotypování biologického materiálu odebraného při potratu.

Abstract

Využití laserové mikrodisekce ke genotypování biologického materiálu odebraného při potratu Abstrakt Laserová mikrodisekce se ve forenzní genetice používá především jako metoda separace buněk ze vzorků smíšených biologických stop sexuálně motivovaných trestných činů. Využití však nalezla i u případů určení otcovství genotypováním biologického materiálu odebraného při potratu. Ze vzorků se separuje fetální část placenty a stanoví se čistý profil DNA fétu, který je možný porovnat s profilem DNA podezřelého. Cílem této práce byla aplikace metody laserové mikrodisekce k separaci choriových klků z placenty a následná genetická analýza vedoucí ke stanovení čistého fetálního profilu DNA. Dalším cílem byla optimalizace a příprava metody pro její zavedení do forenzní praxe. Optimalizace přípravy vzorků proběhla v první fázi na testovacích tkáňových řezech svalové tkáně a epitelových buňkách z bukálních stěrů. Ve druhé fázi byl použit experimentální materiál z potratů od dobrovolných dárkyň. Zároveň proběhlo testování techniky přímo na materiálu získaném z trestné činnosti. Výsledkem bylo stanovení čistého fetálního profilu DNA separací 10 buněk choriových klků odebraných metodou laserové mikrodisekce. Klíčová slova Laserová mikrodisekce, tkáňové řezy, placenta, choriové klky, fetální profil DNA, stanovení otcovství

The use of laser microdissection for the genotyping of biological material isolated during an abortion Abstract In forensic genetics laser microdissection is used mainly as a method of cell separation from samples of mixed biological traits of sexually motivated crimes. It can also be used in paternity testing via genotyping of biological material isolated during an abortion. The foetal part of placenta is separated from the acquired samples and a pure DNA profile of the foetus is determited. This DNA can be compared to the suspect's DNA. The goal of this project is the application of laser microdissection to separate chorionic villi from a placenta and the subsequent genetic analysis leading to the determination of a pure foetal DNA profile. A secondary goal was the preparation and optimization of the method necessary for its introduction to forensic practice. In the first phase the optimization of the sample preparation was conducted on test sections of muscular tissue and epithelial cells from a buccal swap. Experimental material acquired during abortions of voluntary donors was used in the second phase. This technique was simultaneously tested on material directly linked to criminal acts. The separation of 10 chorionic villi cells with the method of laser microdissection eventually resulted in the...